Caracterização bioquímica e molecular do componente transcriptase reversa da telomerase de Leishmania spp.

• Processo: 03/01783-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2003
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2007
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Maria Isabel Nogueira Cano
• Beneficiário: Miriam Aparecida Giardini
• Instituição Sede: Instituto de Biologia (IB). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 00/01138-6 - Complexo telomérico de Leishmania spp: dinâmica da replicação, otimização da purificação da telomerase e identificação de possíveis componentes da holenzima, AP.JP
• Assunto(s): Leishmania Bioquímica animal Clonagem Telomerase
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Caracterizacao Bioquimica | Clonagem Genica | Leishmania Spp | Telomerase | Telomeros | Transcriptase Reversa

Resumo

Os telômeros são complexos de DNA e proteínas que protegem os cromossomos eucarióticos da degradação e, dessa forma, garantem estabilidade genômica. Em leishmanias, as seqüências teloméricas são do tipo 5'-TTAGGG-3' e são replicadas pela telomerase (TERT). O intuito deste projeto é purificar e caracterizar bioquimicamente a TERT de L. amazonensis e clonar e estudar funcionalmente o gene que a codifica. Para a purificação, serão utilizados métodos cromatográficos complementares e separação por gradiente de sedimentação em glicerol, testando-se a atividade de telomerase dos produtos por "Two-tube TRAP". A clonagem das seqüências que codificam os genes TERT de Leishmania spp será realizada a partir de seqüência homóloga encontrada no banco de dados público do projeto genoma de L. major. A caracterização dos genes que codificam as TERTs de Leishmania spp. será realizada por análise dos transcritos por "Northern blotting", estimativa do número de cópias gênicas por "Southern blotting", o mapeamento cromossômico por PFGE ("Pulsed Field Gel Electrophoresis") e o estudo funcional das seqüências pela superexpressão dos genes utilizando-se o vetor de expressão transitória pX63NEO para transformação em leishmania. Os resultados deste trabalho poderão contribuir para uma maior compreensão sobre a estrutura e o funcionamento da enzima telomerase em Leishmania spp. e avaliá-lo como um alvo potencial para o desenvolvimento de drogas. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

GIARDINI‚ M.A.; LIRA‚ C.B.B.; CONTE‚ F.F.; CAMILLO‚ L.R.; DE SIQUEIRA NETO‚ J.L.; RAMOS‚ C.H.I.; CANO‚ M.I.N.. The putative telomerase reverse transcriptase component of Leishmania amazonensis: gene cloning and characterization. Parasitology Research, v. 98, n. 5, p. 447-454, 2006. (00/01138-6, 03/01783-7)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

GIARDINI, Miriam Aparecida. Caracterização bioquimica e molecular do componente transcriptase reversa da telomerase de Leishmania spp. 2007. Tese de Doutorado - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia Campinas, SP.