Caracterização bioquímica e molecular do componente transcriptase reversa da telomerase de Leishmania spp.

Resumo

Os telômeros são complexos de DNA e proteínas que protegem os cromossomos eucarióticos da degradação e, dessa forma, garantem estabilidade genômica. Em leishmanias, as seqüências teloméricas são do tipo 5'-TTAGGG-3' e são replicadas pela telomerase (TERT). O intuito deste projeto é purificar e caracterizar bioquimicamente a TERT de L. amazonensis e clonar e estudar funcionalmente o gene que a codifica. Para a purificação, serão utilizados métodos cromatográficos complementares e separação por gradiente de sedimentação em glicerol, testando-se a atividade de telomerase dos produtos por "Two-tube TRAP". A clonagem das seqüências que codificam os genes TERT de Leishmania spp será realizada a partir de seqüência homóloga encontrada no banco de dados público do projeto genoma de L. major. A caracterização dos genes que codificam as TERTs de Leishmania spp. será realizada por análise dos transcritos por "Northern blotting", estimativa do número de cópias gênicas por "Southern blotting", o mapeamento cromossômico por PFGE ("Pulsed Field Gel Electrophoresis") e o estudo funcional das seqüências pela superexpressão dos genes utilizando-se o vetor de expressão transitória pX63NEO para transformação em leishmania. Os resultados deste trabalho poderão contribuir para uma maior compreensão sobre a estrutura e o funcionamento da enzima telomerase em Leishmania spp. e avaliá-lo como um alvo potencial para o desenvolvimento de drogas. (AU)