Estudo da replicação do vírus dengue-2 sob a ação de drogas inibidoras do metabolismo celular

• Processo: 04/03635-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2004
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2006
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Microbiologia Aplicada
• Pesquisador responsável: Benedito Antônio Lopes da Fonseca
• Beneficiário: Kleber Juvenal Silva Farias
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Reação em cadeia da polimerase em tempo real Replicação viral Metabolismo celular Células HeLa Vírus da dengue
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Celulas Hela, Vero E C6/36 | Pcr Em Tempo Real | Replicacao Viral | Titulacao Viral | Virus Dengue Tipo-2

Resumo

O vírus Dengue-2 é membro da família flaviviridae, possui um genoma RNA de polaridade positiva, fita simples, de cerca de 11 kb, que codifica uma única poliproteina, incluindo três proteínas estruturais e sete não-estruturais. Este projeto tem como objetivo estudar os efeitos dos inibidores do metabolismo celular sobre a replicação do vírus dengue-2 em relação ao citoesqueleto, aumento do pH endossomal e a interrupção do fluxo vesicular do retículo endoplasmático para o aparelho de Golgi. A metodologia utilizará o cultivo de células C6/36, HeLa e Vero, sendo que as monocamadas confluentes destas células serão infectadas com vírus dengue-2, a uma multiplicidade de infecção (MOI) de 1 pfu por célula, para se obter o estoque viral. Para se ter certeza de que está ocorrendo a replicação viral, será realizado uma imunofluorescência indireta na monocamada celular, e será realizada a extração do RNA total do sobrenadante através do Kit QIAamp RNA Viral (QIAGEN, USA). O ensaio de inibição metabólica será realizado em monocamadas de células Vero e HeLa crescidas em placas de 24 cavidades, sendo estas tratadas com as drogas Cloroquina, Cytochalasin B e Brefeldin A em concentrações pré-determinadas, deixando-se as drogas em contato com as células e coletando-se amostras em períodos determinados. A ação das drogas sobre a acidificação endossomal, citoesqueleto e do fluxo vesicular e o conseqüente efeito na replicação viral serão analisados através da titulação viral (infectividade) em células e por PCR em Tempo Real. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

SILVA FARIAS, KLEBER JUVENAL; LIMA MACHADO, PAULA RENATA; LOPES DA FONSECA, BENEDITO ANTONIO. Chloroquine Inhibits Dengue Virus Type 2 Replication in Vero Cells but Not in C6/36 Cells. SCIENTIFIC WORLD JOURNAL, 2013. (05/04450-4, 04/03635-8)

SILVA FARIAS, KLEBER JUVENAL; LIMA MACHADO, PAULA RENATA; LOPES DA FONSECA, BENEDITO ANTONIO. Chloroquine Inhibits Dengue Virus Type 2 Replication in Vero Cells but Not in C6/36 Cells. SCIENTIFIC WORLD JOURNAL, v. N/A, p. 5-pg., 2013-01-01. (04/03635-8, 05/04450-4)