Comparação de técnicas moleculares para identificação das espécies de fusarium de amostras clínicas

Autor(es)

Marcela de Souza

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Ciências Médicas
• Data de defesa: 2014-02-13

Membros da banca

Plinio Trabasso; Mariângela Ribeiro Resende; Luci Correa

• Orientador: Plinio Trabasso

Resumo

Este trabalho teve por objetivo comparar o desempenho das técnicas de microarranjo de DNA (DNA microarray), amplificação circular isotérmica (Loop mediated isothermal amplification (LAMP)), PCR em tempo real e sequenciamento de DNA para a identificação das espécies de Fusarium, agentes de infecção da corrente sanguínea, isolados de pacientes com doenças onco-hematológicas do Hospital de Clínicas da Universidade Estadual de Campinas (HC-Unicamp) e do Hospital de Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (FMUSP) em um estudo de corte retrospectivo. Foram selecionados 21 amostras de Fusarium isoladas de sangue, sendo 17 amostras da micoteca do Laboratório de Investigação em Fungos (LIF) da Faculdade de Ciências Médicas da Unicamp (FCM-Unicamp) e três amostras da micoteca do Laboratório de Microbiologia da FMUSP. As metodologias de DNA microarray, LAMP e PCR em tempo real, identificaram 17 das 21 amostras como complexo Fusarium solani e quatro como complexo Fusarium não - solani, apresentando um alto desempenho, uma concordância de 100% entre elas e uma sensibilidade de 100% para as metodologias DNA microarray, LAMP e PCR em tempo real e uma especificidade de 100% para a metodologia de LAMP. Esses dados foram validados pela metodologia de sequenciamento de DNA, a qual identificou 17 amostras como complexo Fusarium solani e quatro como Fusarium complexo não ¿ solani, sendo três Fusarium napiforme e um Fusarium oxysporum, concordando com os resultados encontrados nas três metodologias aplicadas neste trabalho. A técnica de LAMP demonstrou ser mais acessível do que as técnicas de DNA microarray e PCR em tempo real por ser mais rápida, indicando ser uma metodologia promissora para ser utilizada na rotina de diagnóstico de fungos filamentosos, auxiliando em uma terapia apropriada de uma forma rápida e específica, proporcionando assim uma melhora na assistência prestada ao paciente (AU)

• Processo FAPESP: 11/16205-5 - Identificação das espécies de Fusarium de amostras clínicas do Hospital de Clínicas da UNICAMP através das técnicas de Microarranjo de DNA e amplificação isotérmica em ciclos (LAMP).
• Beneficiário: Marcela de Souza
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado