Atividade antifúngica do extrato bruto e frações de Streptococcus mutans sobre Candida albicans em modelos de estudo in vivo

Autor(es)

Jéssica Diane dos Santos

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: São José dos Campos. 2018-02-16.
• Instituição: Universidade Estadual Paulista (Unesp). Instituto de Ciência e Tecnologia. São José dos Campos
• Data de defesa: 2018-01-15
• Orientador: Juliana Campos Junqueira

Resumo

Estudos realizados in vitro tem demonstrado que Streptococcus mutans podem produzir metabólitos capazes de inibir Candida albicans, tornando interessante a identificação e desenvolvimento de novas substâncias para o tratamento da candidose bucal. Assim, o objetivo desse estudo foi extrair, fracionar e identificar as substâncias produzidas por S. mutans e avaliar seus efeitos sobre a patogenicidade de C. albicans e na resposta imunológica em modelos de estudo in vivo. As substâncias do sobrenadante da cultura de S. mutans foram extraídas com acetato de etila e posteriormente fracionadas em coluna de sílica derivatizada C-18 (150 g, Φ = 3,5 cm) utilizando diferentes soluções de MeOH:H2O (36:64, 49:51, 60:40, 76:24, 100:0) como eluente, obtendo cinco diferentes frações (SM-F1, SM-F2, SMF3, SM-F4 e SM-F5). A identificação das substâncias contidas no extrato bruto e frações foi realizada por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas. Foram testados os efeitos do extrato bruto e frações do sobrenadante da cultura de S. mutans sobre a candidose experimental induzida em modelo invertebrado de Galleria mellonella e em camundongos imunossuprimidos. Para a escolha da concentração a ser testada nos modelos in vivo foi realizada a determinação da Concentração Inibitória Mínima do extrato bruto e frações sobre C. albicans. No modelo de infecção experimental com G. mellonella, os efeitos do extrato e frações foram analisados pelos testes de curva de sobrevivência, quantificação de UFC/mL de C. albicans na hemolinfa e determinação da densidade hemocitária das larvas de G. mellonella. O extrato, assim como as frações com melhores resultados em modelo de invertebrado foram selecionados para o estudo de candidose bucal em camundongos. Nesse modelo experimental, o desenvolvimento de candidose foi avaliado pelos testes de recuperação e determinação de UFC/mL de C. albicans da cavidade bucal, análise macroscópica e microscópica do dorso da língua. Os dados obtidos foram analisados estatisticamente pelo Programa Graph Pad Prism 5.0, com nível de significância de 5%. Na determinação da concentração inibitória mínima, apenas o extrato bruto e a fração SM-F2 demonstraram efeito sobre C. albicans, sendo 10 mg/mL e 15mg/mL, respectivamente. No modelo de G. mellonella não houve aumento da sobrevida das larvas com a utilização profilática do extrato, ocorrendo 100% de morte nas primeiras 24 h em ambos os grupos com infecção. No entanto, ao realizarmos o tratamento pós-infecção com o extrato bruto houve um aumento da sobrevida em 18,75 a 25%. Como não houve efeito profilático para o extrato bruto, as frações foram administradas apenas terapeuticamente, verificando-se aumento da sobrevida das larvas com as fração SM-F1 e SM-F2. Na contagem de UFC/mL de C. albicans na hemolinfa das larvas, foi verificada diferença estatisticamente significante apenas com o extrato bruto e fração SM-F2 após 12 h de infecção. Em relação a densidade hemocitária, os grupos tratados com extrato bruto e frações (SM-F1 e SM-F2) apresentaram maior número de hemócitos circulantes na hemolinfa em relação ao grupo apenas infectado com C. albicans. Portanto, as frações SM-F1 e SM-F2 foram escolhidas para os testes em camundongos. Nesse modelo de estudo, verificou-se que o extrato bruto, SM-1 e SM-F2 foram capazes de reduzir significamente o número de UFC/mL de Candida na cavidade bucal e as lesões de candidose no dorso da língua, sendo esses efeitos mais proeminentes para SM-F2. Assim, concluiu-se que as frações SM-F1 e SM-F2 do extrato de S. mutans contêm substâncias antifúngicas com ação terapêutica sobre a candidose experimental, podendo ser alvos de novas estratégias terapêuticas para a candidose bucal. (AU)

• Processo FAPESP: 16/03395-4 - Atividade antimicrobiana de metabólitos produzidos por Streptococcus mutans sobre Candida albicans em modelos de estudo in vivo
• Beneficiário: Jéssica Diane dos Santos
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado