Cicatrização de feridas em camundongos FAT-1: envolvimento da via anti-inflamatória colinérgica = Wound healing in FAT-1 mice: involvement of the cholinergic anti-inflammatory pathway

Autor(es)

Thamiris Candreva

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Limeira, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Ciências Aplicadas
• Data de defesa: 2017-11-17

Membros da banca

Hosana Gomes Rodrigues; Maria Cláudia Gonçalves de Oliveira; Eliana Pereira de Araujo

• Orientador: Hosana Gomes Rodrigues

Resumo

A inflamacao e a primeira fase do processo de cicatrizacao de feridas e esta pode ser dividida em resposta inflamatoria inicial e tardia. A resposta inflamatoria tardia e essencial ao controle de mediadores pro-inflamatorios e resolucao da inflamacao, sendo determinante ao inicio da proxima fase de formacao de tecido ou proliferacao. Acidos graxos poli-insaturados das familias 'omega'-6 e 'omega'-3, modulam o perfil inflamatorio, sendo cada vez mais estudados no processo de reparo tecidual. Assim, buscando compreender o papel destes acidos graxos na fase inflamatoria tardia do processo de cicatrizacao de feridas, utilizamos como objeto de estudo, camundongos transgenicos denominados FAT-1, capazes de produzir endogenamente, acidos graxos 'omega'-3 a partir de acidos graxos 'omega'-6. Para verificar a composicao lipidica destes camundongos, avaliamos por cromatografia gasosa, o plasma e o tecido cicatricial, 3 dias apos a inducao da ferida. No plasma, os camundongos transgenicos reduziram a concentracao do acido graxo araquidonico (AA) e aumentaram a concentracao dos acidos graxos alfa-linolenico (ALA), eicosapentaenoico (EPA) e docosahexaenoico (DHA), reduzindo a proporcao 'omega'-6/'omega'-3 em 32,9%, quando comparados ao grupo wild type (WT). Ja no tecido cicatricial, estes camundongos apresentaram reducao da porcentagem de AA nas classes lipidicas teciduais de fosfatidilcolina (PC) e fosfatidiletalonamina (PE) e, aumento dos acidos graxos docosapentaenoico (DPA) e DHA nas classes lipidicas teciduais de PC, PE e de triacilglicerol (TAG). Com isto, os camundongos transgenicos obtiveram uma reducao da proporcao 'omega'-6/'omega'-3, equivalente a 56,4% em PC, 55,1% em PE e 39,1% em TAG, em relacao ao grupo WT. Em analise do fechamento da ferida pelo programa Image J, os camundongos FAT-1 mantiveram a area da ferida maior desde o 1¿ dia apos a inducao, sendo que no ultimo dia de analise (14¿ dia), a area da ferida era duas vezes maior que a do grupo WT (p<0.01). Na analise da atividade da mieloperoxidase (MPO) por espectrofotometria, os camundongos transgenicos exibiram aumento da atividade no tecido cicatricial de 3 dias, quando comparados ao grupo WT (p<0.05). Considerando este mesmo tempo de ferida para todas as demais analises, observamos atraves de PCR em tempo real, que os camundongos FAT-1 aumentaram a expressao genica dos marcadores celulares CD206 e CD280 (p<0.05), representativos de macrofagos M2. Contudo, pelo metodo de ELISA, verificou-se que estes camundongos aumentaram a producao dos mediadores: IL-6 (p<0.05), CXCL1 (p<0.05), CXCL2 (p<0.01), TIMP-1 (p<0.01) e VEGF (p<0.05) e reduziram IL-10 (p<0.05), indicando uma modulacao da resposta inflamatoria tardia. Buscando investigar se a via anti-inflamatoria colinergica estaria influenciando esta resposta, analisamos a producao de acetilcolina (ACh) e colina livre pelo metodo colorimetrico, a atividade da acetilcolinesterase (AChE) por espectrofotometria e a expressao das proteinas 'alfa'7nAChR, STAT3 e pSTAT3, por western blottting. Os camundongos FAT-1, aumentaram a expressao proteica da 'alfa'7nAChR (p<0.001) e reduziram pSTAT3 (p<0.05), exibindo um comprometimento da propagacao do sinal anti-inflamatorio, no ambiente intracelular. Para analisar o impacto desta inflamacao tardia exacerbada, analisamos por PCR array, a expressao de genes presentes em todo o processo de cicatrizacao de feridas. No grupo FAT-1, genes essenciais a formacao e manutencao da matriz extracelular (MEC) foram negativamente modulados. Assim, concluimos que o nao controle da resposta inflamatoria tardia pelos camundongos FAT-1, pode ter prejudicado as funcoes da MEC e contribuido para o atraso no reparo tecidual (AU)

• Processo FAPESP: 16/02021-3 - Cicatrização de feridas em camundongos FAT-1: envolvimento da via anti-inflamatória colinérgica
• Beneficiário: Thamiris Candreva Robles
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado