Caracterização das proteínas hNek5 e hNek10 no contexto da resposta do dano no DNA: uma abordagem funcional e interactômica = Characterization of the hNek5 and hNek10 proteins in the DNA damage response context : a functional and interatomic approach

Autor(es)

Priscila Ferreira Papa

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia
• Data de defesa: 2015-07-08

Membros da banca

Jörg Kobarg; Jenifer Saffi; Guido Lenz; Adriana Franco Paes Leme; Aline Mara dos Santos

• Orientador: Jörg Kobarg

Resumo

A família de proteínas serina/treonina cinases Nek (NIMA related kinases) são similares ao seu homólogo NIMA (never in mitosis, gene A), uma proteína altamente conservada e crítica para a progressão do ciclo celular em Aspergillus nidulans. O interactoma e as funções dos 11 membros das Neks (1-11) em mamíferos permitiu associá-los à tríade funcional (1) mitose/centrossomo, (2) cílio primário/ciliopatias e (3) resposta ao dano no DNA, em revisão publicada por nosso grupo (Artigo I). Dentre eles, hNek5 e hNek10 são as menos caracterizadas quanto ao seu papel biológico. Assim, ensaios de duplo híbrido para Nek5 identificaram proteínas relacionadas à processos mitocondriais, dentre elas BCLAF1, Cox11 e MTX2, e ao dano no DNA, como BCLAF1 e TOPII?. Ensaios de colocalização e fracionamento subcelular indicaram a localização mitocondrial de hNek5 e seus efeitos na resistência à morte celular através de ensaios de apoptose e viabilidade celular (Artigo II). hNek5 pode ainda estar envolvida na resposta ao dano ao DNA à diversas drogas genotóxicas causando efeitos na parada do ciclo celular, estresse replicativo e desregulação na ativação de proteínas importantes para as respostas do dano no DNA (Artigo III). O interactoma de hNek10 foi analisado através de duas abordagens: (1) Screening de duplo híbrido indicando 12 interactores e (2) Espectrometria de massas identificando 58 e 117 proteínas interactoras sem e com indução de dano no DNA, respectivamente, associadas à processos biológicos como ciclo celular mitótico, proliferação celular, expressão gênica, processamento de RNA. Dentre as proteínas, confirmamos a interação com dois membros do complexo de coesinas, SMC1 e SMC3 e a depleção de hNek10 causou multinucleação, multilobulação nuclear, acúmulo na fase G1/S do ciclo celular, foci de ?-H2AX e aumento da morte celular; sugerindo que o silenciamento de hNek10 pode sensibilizar a célula à danos endógenos de DNA (Artigo IV). Isto posto, os estudos funcionais e interactômicos de hNek5 e hNek10 presentes neste trabalho permitiram caracterizá-las em novos processos biológicos, em especial, na resposta do dano no DNA (AU)

• Processo FAPESP: 10/15262-2 - Clonagem e expressão da proteína cinase Nek10 humana visando estudos estruturais e funcionais moleculares e celulares
• Beneficiário: Priscila Ferreira Papa
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto