Avaliação do papel dos eosinófilos nos processos iniciais da vaso-oclusão utilizando camundongos transgênicos para anemia falciforme: participação da via Rho-quinase

Autor(es)

Athos Rodrigues de Moraes

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Ciências Médicas
• Data de defesa: 2018-08-31

Membros da banca

Carla Fernanda Franco Penteado; Anderson Ferreira da Cunha; Marcus Alexandre Finzi Corat

• Orientador: Carla Fernanda Franco Penteado

Resumo

Na anemia falciforme, os leucócitos possuem um importante papel na fisiopatologia da doença sendo consideradas as células iniciadoras do processo vaso-oclusivo. A vaso-oclusão na anemia falciforme resulta de um processo complexo que envolve diferentes mecanismos e interações dos glóbulos vermelhos, leucócitos, células endoteliais, plaquetas e proteínas plasmáticas. A via da Rho GTPases parece ter um papel importante nos mecanismos moleculares da quimiotaxia, adesão e migração de várias células inflamatórias e pouco se sabe o papel dessas proteínas da via Rho GTPases no rolamento, adesão ao endotélio vascular e extravasamento dos leucócitos. Objetivo desse trabalho foi avaliar in vivo a participação dos eosinófilos no processo de vaso-oclusão na anemia falciforme e o envolvimento da via das Rho GTPases nesse processo na resposta inflamatória induzida por OVA nos animais controles (C57BL/6 J) e camundongos falciformes modelo Townes homozigotos (SS). Os resultados obtidos por microscopia intravital convencional do músculo cremaster dos camundongos mostraram que após 4 horas do desafio com eotaxina foi observado um aumento no número de leucócitos em rolamento e aderidos ao endotélio vascular em todos os grupos sensibilizados investigados, porém, essa inflamação é potencializada quando comparados os animais SS com o grupo controle. Resultados semelhantes foram observados em relação ao extravasamento dos leucócitos. O tratamento com o inibidor específico de Rho GTPase/ROCK, Fasudil, foi capaz de reduzir significativamente tanto o rolamento quando a adesão dos leucócitos ao endotélio vascular do músculo cremaster em todos os grupos, porém foi mais significativamente nos animais falciformes. Em contrapartida à transmigração endotelial, o tratamento com Fasudil foi capaz de reduzir significativamente somente o extravasamento dos leucócitos nos animais SS, não reduzindo nos animais controles. Foi feito microscopia intravital confocal para a diferenciação dos leucócitos totais, observamos que o número de eosinófilos em rolamento e aderidos ao endotélio vascular nos animais controles e SS sensibilizados com OVA foram significativamente maiores quando comparados aos seus respectivos grupos não sensibilizados. No entanto, os parâmetros de adesão e rolamento foram significativamente maiores nos animais falciformes quando comparados com os animais controle. Em relação ao extravasamento transendotelial dos eosinófilos não observamos diferenças significativas entre os grupos não sensibilizados e sensibilizados SS, porém, nos animais controle observamos um aumento significativo de eosinófilos extravasados nos animais sensibilizados em comparação aos não sensibilizados. O tratamento com Fasudil foi capaz de reduziu significativamente o rolamento e adesão dos eosinófilos ao endotélio nos animais do grupo falciforme, além disso o Fasudil reduziu significativamente o extravasamento dos eosinófilos ao endotélio vascular do músculo cremaster nos animais falciformes. Tomados em conjunto, o tratamento com o inibidor de ROCK é capaz de reduzir a interação dos leucócitos e eosinófilos com o endotélio vascular no modelo de inflamação alérgica. Desse modo, sugerimos que inibidores dessa via podem ser novos agentes terapêuticos no tratamento das complicações clínicas da anemia falciforme (AU)

• Processo FAPESP: 15/26929-1 - Avaliação in vivo do papel dos eosinófilos na vaso-oclusão utilizando camundongos transgênicos para anemia falciforme: participação da via RHO-quinase
• Beneficiário: Athos Rodrigues de Moraes
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado