Propriedades biológicas e bioquímicas de variantes naturais de HPV-18

Autor(es)

Emily Montosa Nunes

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: São Paulo.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Medicina (FM/SBD)
• Data de defesa: 2020-06-09

Membros da banca

Laura Cristina Sichero Vettorazzo; Leticia Veras Costa Lotufo; Maria Cristina Rodrigues Rangel

• Orientador: Laura Cristina Sichero Vettorazzo

Resumo

As infecções por HPV-16 e HPV-18 estão fortemente associadas ao risco de desenvolvimento de câncer cervical. Em todo o mundo, o HPV-16 é o tipo mais prevalente em carcinomas escamosos invasivos do colo do útero, seguido de HPV-18, o qual é similarmente prevalentes nos casos de adenocarcinoma. A variabilidade nucleotídica intra-típica de HPV-18 tem sido estudada resultando em importantes achados no que concerne à filogenia e evolução do vírus e a história natural das infecções. Embora os estudos acerca da relevância clínica da variabilidade genética de HPV-18 são limitados, sugeriu-se que variantes Ameríndias (As+AI) e Européias (E) representem isolados com um maior potencial oncogênico, quando comparadas às variantes Africanas (Af). Ademais, foi observado que variantes Af de HPV-18 são exclusivamente detectadas nas amostras de carcinoma escamoso invasivo do colo do útero, ao passo que variantes E e As+AI são mais prevalentes em adenocarcinoma e carcinoma adenoescamoso. No que concerne às diferenças biológicas entre as variantes de HPV-18, é fundamental ressaltar que há poucos estudos conduzidos até o momento e estes exploraram somente a variabilidade da oncoproteína viral E6, sendo que nenhum dos estudos foi realizado em modelos de células hospedeiras naturais de HPV-18, que são queratinócitos humanos primários (PHK). Pelo exposto, nós caracterizamos funcionalmente PHKs imortalizados por duas variantes distintas de HPV-18. Os PHKs foram transduzidos com E6/E7 das variantes As+AI e Af de HPV-18 (PHK18AA e PHK18Af, respectivamente) e subcultivados até p30, quando estes foram considerados imortalizados. Os PHK18AA atingiram à imortalização significativamente mais rápido do que os PHK18Af, ainda que uma \"crise\" não fosse observada em nenhum dos PHKs transduzidos. No entanto, não houve diferença nas taxas de proliferação entre os PHK18AA e PHK18Af em p30. Contudo, os PHK18AA imortalizados foram mais eficientes em formar colônias e esferoides em monocamada e cultura tridimensional, respectivamente, em experimentos diversos. Ademais, os PHK18AA imortalizados apresentaram uma maior eficiência em invadir através de uma matriz de colágeno, ainda que diferenças na migração não fossem observadas entre as variantes. Nós também observamos que células primárias de rim de ratos neonatos (BRK) co-transfectadas com E7 Af e RAS geraram um menor número de colônias, o que pode estar associado em parte à incapacidade de E7 Af em formar um complexo com a ubiquitina ligase UBR4 e degradar a proteína supressora tumoral PTPN14. Por outro lado, os PHK18Af imortalizados apresentaram maior resistência à diferenciação em meio enriquecido com soro e cálcio. Finalmente, culturas organotípicas derivadas dos PHKs imortalizados por ambas as variantes de HPV-18 eram semelhantes na morfologia e apresentaram níveis equivalentes de proteínas associadas à diferenciação e proliferação celular. Em conjunto, nossos dados indicam que a variante As+AI de HPV-18 tem um maior potencial oncogênico em comparação à variante Af, além das variantes interagirem diferentemente com alguns alvos celulares. Este estudo é único em analisar as propriedades bioquímicas e biológicas das oncoproteínas E6/E7 de variantes naturais HPV-18 no contexto do hospedeiro natural, isto é, as células epiteliais (AU)

• Processo FAPESP: 15/26346-6 - Propriedades biológicas e bioquímicas de variantes naturais de HPV-18
• Beneficiário: Emily Montosa Nunes
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado