Proteômica baseada em espectrometria de massas na descoberta de candidatos à biomarcadores em câncer e na identificação de novos alvos de ADAM17

Autor(es)

Rebeca Kawahara

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia
• Data de defesa: 2015-04-28

Membros da banca

Adriana Franco Paes Leme; Giuseppe Palmisano; Inácio de Loiola Meirelles Junqueira de Azevedo; Vitor Marcel Faça; Marcio Chaim Bajgelman

• Orientador: Adriana Franco Paes Leme

Resumo

A espectrometria de massas aplicada à análise proteômica permite a caracterização e quantificação em larga-escala de proteínas expressas em uma determinada condição ou sistema biológico. Na presente tese, mostramos por meio de diferentes abordagens a utilidade da espectrometria de massas (1) no estudo de proteínas secretadas ou clivadas da superfície (secretoma) por células tumorigênicas como fonte de biomarcadores em câncer (2) na validação de candidatos biomarcadores em saliva humana de pacientes com câncer oral e (3) no estudo de alvos de uma metaloprotease envolvida na progressão de câncer, a ADAM17 (A disintegrin and metalloproteinase 17). Os resultados gerados pela espectrometria de massas juntamente com ferramentas estatísticas e de bioinformática para visualização de dados em agrupamento, heatmaps, rede de interação proteína-proteína, enriquecimento de vias e processos biológicos indicaram proteínas específicas direcionadas à hipótese que puderam ser validadas por métodos complementares quantitativos e funcionais. No contexto de biomarcadores em câncer, um painel de marcadores foi indicado a partir da análise do secretoma de células de carcinoma, melanoma e não cancerosas. Dentre os candidatos em carcinoma, proteínas envolvidas no sistema complemento foram validadas com expressão aumentada tanto em tecidos (proteínas C3 e CFB) quanto em saliva de pacientes com carcinoma oral de células escamosas (proteínas C3, CFB, C4B e SERPINA1). Agrina e perlecan, também observados com expressão alterada no secretoma de células de carcinoma e validados com expressão aumentada em tecidos de paciente com câncer oral, foram estudados quanto à função em processos tumorigênicos: migração, adesão, proliferação e sensibilidade à cisplatina. No estudo do degradoma da ADAM17, mimecan, perlecan e glypican-1 foram revelados como novos alvos dessa protease, e os sítios de clivagem determinados por espectrometria de massas. Além disso, funções e processos biológicos associados à clivagem de glypican-1 também foram estudados por meio da análise de seus parceiros de interação no meio extracelular seguido de ensaios funcionais. Em resumo, a espectrometria de massas esteve presente em todos os passos do método científico, desde a geração de hipóteses por meio da proteômica baseada em descoberta, até o teste e confirmação de hipóteses por meio da proteômica baseada em alvos (AU)

• Processo FAPESP: 11/22421-2 - Determinação dos sítios de clivagens de alvos de ADAM-17 recombinante em cultura de células humanas
• Beneficiário: Rebeca Kawahara Sakuma
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto