Texto completo
| |
| Autor(es): |
Ricardo de Marco
Número total de Autores: 1
|
| Tipo de documento: | Tese de Doutorado |
| Imprenta: | São Paulo. |
| Instituição: | Universidade de São Paulo (USP). Conjunto das Químicas (IQ e FCF) (CQ/DBDCQ) |
| Data de defesa: | 2003-02-24 |
| Membros da banca: |
Sergio Verjovski Almeida;
Wim Maurits Sylvain Degrave;
Emmanuel Dias Neto;
Hamza Fahmi Ali El Dorry;
Hernando Antonio Del Portillo Obando
|
| Orientador: | Sergio Verjovski Almeida |
| Resumo | |
Este trabalho demonstrou a construção de minibibliotecas de \"Expressed Sequence Tags\" (EST) com o uso de RT-PCR de baixa estringencia e \"primer\" consenso-degenerado. Através do estudo de parâmetros críticos como concentração de sais, temperatura e velocidade de ciclagem, composição dos \"primers\" e qualidade do RNA mensageiro, foi possível padronizar um protocolo. Tal protocolo permitiu um aumento do numero de seqüências por minibiblioteca em relação a protocolos similares existentes na literatura (Dias neto et al., 1997 e 2000) sem perda de características desejáveis como amplificação preferencial do centro dos genes e nomalização das mensagens. As seqüências produzidas levaram a um significativo aumento das seqüências de EST de S. mansoni disponíveis publicamente e permitiu a detecção da existência de novos fragmentos de genes expressos na fase adulta do parasita. Neste trabalho também clonamos uma apirase de S. mansoni cuja a seqüência não havia sido descrita anteriormente. O gene possui cerca de 2,7 mil pares de bases e codifica para uma proteína de 544 aminoácidos. Esta foi expressa em sistema heterologo e utilizada para obtenção de anticorpos policlonais contra esta proteína. Utilizando estes anticorpos foi possível detectar a proteína no tegumento do parasita. (AU) | |
| Processo FAPESP: | 98/15660-4 - Construção e caracterização de minibibliotecas de EST de Schistossoma mansoni geradas com primers híbridos consenso-degenerado |
| Beneficiário: | Ricardo de Marco |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Brasil - Doutorado |