Clonagem e expressão da glucocerebrosidase humana em células de ovário de hamster chinês (CHO).

Autor(es)

Juliana Branco Novo

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: São Paulo.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Ciências Biomédicas (ICB/SDI)
• Data de defesa: 2010-06-24

Membros da banca

Paulo Lee Ho; Lygia da Veiga Pereira Carramaschi; Patricia Léo; Ana Maria Moro; Mari Cleide Sogayar

• Orientador: Paulo Lee Ho

Resumo

Deficiência na enzima lisossomal glucocerebrosidase (GCR) resulta na doença de Gaucher. O tratamento atual consiste na administração da enzima exógena, produzida em células CHO. Porém, o medicamento disponível no mercado é extremamente custoso. Neste trabalho, propusemos a clonagem e a expressão da GCR humana em células CHO, visando a obtenção de um clone celular produtor para viabilizar a produção futura da enzima, a um custo menor, no Instituto Butantan. A expressão estável da GCR recombinante foi obtida a partir da transfecção de células CHO-dhfr- com o plasmídeo pED de expressão em células de mamíferos contendo o cDNA da GCR, seguido de amplificação gênica por MTX. A GCR foi detectada no extrato celular (~ 64 kDa) e secretada para o sobrenadante (63-69 kDa) em ensaios de western blotting, usando o anticorpo policlonal anti-GCR gerado neste trabalho. A enzima secretada hidrolisou o substrato 4-MUG e a sua produtividade foi estimada em 5,14 pg/célula/dia para o melhor subclone produtor, selecionado para a produção futura da GCR em larga escala. (AU)

• Processo FAPESP: 07/50937-8 - Clonagem e expressão da glucocerebrosidase humana em células de ovário de hamster chinês (DHO)
• Beneficiário: Juliana Branco Novo
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto