Expressão, purificação e caracterização de proteínas de superfície de Leptospira interrogans.

Autor(es)

Marina von Atzingen dos Reis

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: São Paulo.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Ciências Biomédicas (ICB/SDI)
• Data de defesa: 2009-04-03

Membros da banca

Ana Lucia Tabet Oller do Nascimento; Marina Baquerizo Martinez; Roxane Maria Fontes Piazza; Aline Maria da Silva; Ana Marisa Chudzinski Tavassi

• Orientador: Ana Lucia Tabet Oller do Nascimento

Resumo

O sequenciamento genômico da L. interrogans sorovar Copenhageni e ferramentas de bioinformática nos permitiram selecionar 15 genes que codificam proteínas hipotéticas conservadas preditas de superfície. A conservação foi confirmada por PCR em seis dos sorovares mais predominantes de L. interrogans. As proteínas recombinantes foram clonadas em vetor de expressão de E. coli em fusão com seis resíduos de histidina, que permite a purificação por cromatografia de afinidade a metal. Seis proteínas apresentaram reatividade com anticorpos presentes em soros de pacientes com leptospirose. Através de um ensaio de adesão por ELISA, identificamos uma nova adesina de leptospira, Lsa21, que interage fortemente com laminina, colágeno IV e fibronectina plasmática. Usando a metodologia de Western blotting, identificamos mais nove possíveis adesinas. Nossos ensaios de desafio demonstraram que as proteínas rLIC12730 conferiu proteção contra infecção letal de L. interrogans em hamsters. Nossos dados sugerem que seja um promissor candidato na prevenção da leptospirose. (AU)

• Processo FAPESP: 03/10028-8 - Expressão, purificação e caracterização de proteínas de superfície de Leptospira interrogans
• Beneficiário: Marina von Atzingen dos Reis
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto