A ativação da NADPH oxidase mediada pela superexpressão da Dissulfeto Isomerase proteica em células musculares lisas vasculares

Autor(es)

Renata de Castro Gonçalves

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: São Paulo.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Medicina (FM/SBD)
• Data de defesa: 2016-12-14

Membros da banca

Denise de Castro Fernandes; Miriam Helena Fonseca Alaniz; Marilene Demasi

• Orientador: Denise de Castro Fernandes

Resumo

O fenótipo das células musculares lisas vasculares (VSMC) depende de fatores instrínsecos e extrínsecos, que incluem a sinalização redox dependente da NADPH oxidase (NOX). A expressão / atividade da Nox1 estimuladas por fatores de crescimento é regulada pela chaperona oxidoredutase dissultefo isomerase proteica (PDI). A PDI é necessária para a migração de VSMC e organização de seu citoesqueleto, e a PDI extracelular contrabalanceia o remodelamento constritivo vascular por reorganização do citoesqueleto. Tal padrão efeitos da PDI nos levou à hipótese de que a PDI poderia orquestrar alterações fenotípicas das VSMC, e para testálas desenvolvemos VSMC que superexpressam PDI de forma induzível por tratamento com doxiciclina (VSMC- PDIteton ). Observamos que a superexpressão de PDI prolongada (por 72h) aumenta o comprimento celular e induz a expressão de marcadores de diferenciação calponina, ?-actina, e smoothelina, cujo aumento foi inibido após a incubação com catalase. A produção de superóxido intracelular aumentou após 48h de superexpressão de PDI, produzido parcialmente pela Nox1, conforme inibição por GKT136901 ou peptídeo NOXA1ds. Em curto prazo, a superexpressão da PDI (40h) aumentou a distância percorrida em ensaio de migração de célula única. Finalmente, o silenciamento da PDI em VSMC diminuiu espontaneamente a expressão do marcador de diferenciação (calponina). Estes dados sugerem que a superexpressão de PDI induz ativação da NADPH oxidase transientemente e que provavelmente a principal isoforma responsável seja a Nox1, enquanto que a superexpressão de PDI sustentada induz alteração no fenótipo de VSMC (AU)

• Processo FAPESP: 13/03363-7 - Estudo do mecanismo de ativação do receptor de Angiotensina II (AT1R) pela superexpressão da Dissulfeto Isomerase Proteíca em células musculares lisas vasculares
• Beneficiário: Renata de Castro Gonçalves
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado