Uma nova ferramenta para o diagnóstico de Escherichia coli enterotoxigênica: obtenção de anticorpos recombinantes contra a toxina termoestável.

Autor(es)

Caio Raony Farina Silveira

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: São Paulo.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Ciências Biomédicas (ICB/SDI)
• Data de defesa: 2013-12-12

Membros da banca

Roxane Maria Fontes Piazza; Geraldo Santana Magalhães; Rosa Maria Silva

• Orientador: Roxane Maria Fontes Piazza

Resumo

Anticorpos recombinantes vêm sendo utilizados como ferramenta diagnóstica por serem produzidos com baixo custo e em larga escala. Partiu-se de um gene sintético que codifica um fragmento de anticorpo (scFv) específico contra a toxina termoestável, com otimização de códons para expressão em Escherichia coli. Esse gene foi amplificado no vetor de clonagem e subclonado em vetor de expressão pET28a. Células E. coli BL21(DE3) foram transformadas com o plasmídeo recombinante e induzidas em meio de expressão. O fragmento de anticorpo obtido estava contido na fração insolúvel, portanto foi submetido a purificado por cromatografia de afinidade ao níquel na presença de ureia, seguido de renaturação. A molécula se apresentou funcional e sem reatividade com inespecífica por ensaios de imunofluorescência e ELISA. Além disso, mostrou-se estável quando armazenada a 4ºC, sendo assim uma ferramenta promissora para ser utilizada no diagnóstico de ETEC para detecção da toxina ST. (AU)

• Processo FAPESP: 10/14659-6 - Obtenção e caracterização de anticorpos monoclonais recombinantes (scFv) contra a toxina termo-estável (st) de Escherichia coli enterotoxigênica (ETEC)
• Beneficiário: Caio Raony Farina Silveira
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado