Formação e caracterização dos complexos formados entre receptores de hormônios tireoidianos e coativadores

Autor(es)

Tábata Renée Doratioto

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia
• Data de defesa: 2016-02-22

Membros da banca

Ana Carolina Migliorini Figueira; Sandra Martha Gomes Dias; Fernanda Apareceida Helena Batista

• Orientador: Ana Carolina Migliorini Figueira

Resumo

O hormônio tireoidiano regula diversas funções do sistema endócrino por meio da interação deste com seu receptor (receptor nuclear de hormônio tireoidiano ¿ TR). Na presença de um ligante esse receptor sofre uma mudança conformacional que permite sua interação com proteínas coativadoras, como a GRIP (proteína de interação com o receptor de glucocorticóide - glucocorticoid receptor interacting protein). A associação do TR com coativadores auxilia na abertura da estrutura da cromatina, através do recrutamento de acetilases de histonas, resultando na ativação da transcrição de diversos genes, principalmente dos genes ligados à produção de proteínas que regulam o metabolismo basal. Este projeto teve como principal objetivo estudar a formação e a caracterização do complexo receptor nuclear com coativador para mapear possíveis interfaces de interação adicionais e entender melhor sua formação. Para isso foram realizados ensaios que possibilitaram avaliar a estequiometria dos complexos, a afinidade entre essas proteínas e também a influência dos ligantes desses receptores na formação dos complexos. Foram desenvolvidos os ensaios de purificação das proteínas e montagem dos complexos (por ensaios de pull down ou coexpressão). Ensaios de anisotropia de fluorescência possibilitaram a verificação da afinidade entre receptroes nucleares (NRs) e a GRIP e do mecanismo de ação do ligante do RXR (Retinoid X Receptor) (ácido 9-cis retinóico ¿ 9C) no complexo TR:RXR:GRIP. Além destes, também foram realizados outros experimentos de caracterização biofísica para avaliar a qualidade das amostras e a estabilidade da estrutura secundária das proteínas e complexos. Como principais resultados, obtivemos dados sobre a afinidade dos complexos e sua estabilidade, que nos mostraram que a presença de construções mais completas são importantes na sua estabilização. Através da anisotropia de fluorescência observamos que o 9C atua no complexo, auxiliando no desligando correpressores. É importante mencionar que este trabalho resultou no maior detalhamento do mecanismo de ativação do TR o que poderá fornecer subsídios, por exemplo, para o planejamento de fármacos (AU)

• Processo FAPESP: 13/26507-4 - Formação e caraterização dos complexos formados entre receptor de hormônios tireoidianos e coativadores
• Beneficiário: Tábata Renée Doratioto
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado