Expressão alterada de microRNAs e seu papel na resistência de células Bcr-Abl+ à terapia com TKI

Autor(es)

Maria Gabriela Berzoti Coelho

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Ribeirão Preto.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (PCARP/BC)
• Data de defesa: 2020-02-19

Membros da banca

Fabíola Attié de Castro; Andréia Machado Leopoldino; Nadia Monesi; Katia Borgia Barbosa Pagnano; Wilson Araújo da Silva Junior

• Orientador: Fabíola Attié de Castro; Eva Maria Hernando Monge

Resumo

A leucemia mieloide crônica (LMC) é uma neoplasia mieloproliferativa caracterizada pela alteração de células-tronco hematopoéticas e aumento da proliferação de células mieloides, as quais mantém sua capacidade de diferenciação. A oncoproteína Bcr-Abl com atividade tirosina-quinase constitutiva (TK) é a responsável pela transformação maligna. A terapia com os inibidores de tirosina-quinase (TKI) é capaz de promover altas taxas de remissão da doença. No entanto, ao menos 25% dos pacientes com LMC são resistentes à terapia com TKI. Apesar de todo o conhecimento sobre a fisiopatologia e progressão da LMC, os mecanismos celulares e moleculares subjacentes à resistência aos TKI não estão completamente elucidados. Nesse contexto, acreditamos que os microRNAs podem contribuir para a resistência das células Bcr-Abl+ ao IM. Os microRNAs são pequenos RNAs endógenos que regulam a expressão gênica. Alterações na expressão de microRNAs tem sido associadas à patogênese de diferentes neoplasias e seu papel no desenvolvimento de resistência à terapias medicamentosas já foi demonstrado em numerosos tipos de câncer. Dessa forma, partimos da hipótese de que a inibição de microRNAs específicos é capaz de sensibilizar células Bcr-Abl+ resistentes à terapia com o IM. A expressão do miR-125a-5p, miR-125b e miR-132 foi avaliada em 61 pacientes com LMC (10 amostras de pacientes ao diagnóstico da LMC, 15 amostras de pacientes nas fases avançadas da doença - fase acelerada e crise blástica - e 36 amostras de pacientes em remissão após o tratamento com IM ou dasatinibe (DAS)). O miR125b foi menos expresso no grupo de pacientes em remissão após tratamento com DAS que nos grupos de pacientes ao diagnóstico ou nas fases avançadas da doença. Outros cinco microRNAs up-regulados em células Bcr-Abl+ foram selecionados através do painel NanoStringTM de microRNAs (miR-23a, miR-24, miR-155, miR-222 e miR-342). A inibição transiente e estável de todos os microRNAs acima citados foi realizada na linhagem celular Bcr-Abl+ resistente ao IM, LAMA-84R. A inibição do miR-125a-5p, miR-132 e miR-23a não foi capaz de sensibilizar as células LAMA-84R ao IM, ao passo que a inibição do miR-125b, miR-24, miR-155, miR-222 e miR-342 promoveu um pequeno aumento de sensibilidade das células LAMA-84R ao IM. Além disso, a superexpressão do miR-222 e do miR-342 na linhagem celular Bcr-Abl+ sensível ao IM, LAMA-84S, não promoveu a resistência dessas células ao IM. Uma nova abordagem para selecionar microRNAs fortemente associados à resistência ao IM foi realizada, o screen fenotípico baseado na pLX-miR library. Após a análise de sequenciamento de última geração, os microRNAs let-7e, miR-181a, miR-484, miR-616 e miR-96 foram selecionados. A expressão de tais microRNAs foi avaliada nos grupos de pacientes e todos os cinco foram menos expressos nos pacientes em remissão após o tratamento com IM que nos pacientes ao diagnóstico da LMC. Atualmente, os resultados obtidos desta triagem fenotípica estão sendo validados através do nocaute individual dos cinco microRNAs por meio da técnica de edição gênica CRISPR-Cas9. Os resultados obtidos contribuirão para elucidar os mecanismos envolvidos na resistência da LMC ao IM e para a descrição de novos alvos terapêuticos independentes da oncoproteína Bcr-Abl. (AU)

• Processo FAPESP: 15/23555-3 - MicroRNAs reguladores da via HIPPO em Leucemia Mielóide Crônica
• Beneficiário: Maria Gabriela Berzoti Coelho
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado