Investigação do potencial antineoplásico de diferentes classes de inibidores da via IGF1R-IRS1/2 em neoplasia mieloproliferativa

Autor(es)

Jaqueline Cristina Fernandes

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Ribeirão Preto.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (PCARP/BC)
• Data de defesa: 2021-06-11

Membros da banca

Fabíola Traina; Fernando Chahud; Mariana Lazarini; Fernanda Maris Peria

• Orientador: Fabíola Traina; João Agostinho Machado Neto

Resumo

A via de sinalização de IGF1R-IRS1/2 é um alvo potencial em neoplasias mieloproliferativas (NMP). O silenciamento do substrato 2 do receptor de insulina (IRS2) reduziu a viabilidade e aumentou a apoptose em células JAK2V617F. A haploinsuficiência de Igf1r provou uma reversão notável do fenótipo maligno em um modelo de camundongo knockin JAK2V617F. NT157, OSI-906 e NVP-AEW54 são inibidores da via IGF1R-IRS1/2 com efeito antineoplásico em uma variedade de linhagens tumorais, entretanto a melhor estratégia farmacológica para NMP e as consequências moleculares desses inibidores permanece indeterminada. O objetivo deste trabalho foi investigar o potencial antineoplásico de diferentes classes de inibidores da via IGF1R-IRS1/2 em neoplasia mieloproliferativa JAK2V617F. Células Ba/F3 JAK2WT e Ba/F3 JAK2V617F foram submetidas à inibição farmacológica de IGF1R usando NT157 (0,2, 0,4, 0,8, 1,6 e 3,2 &mu;M), OSI-906 (2,5, 5, 10, 20 e 40 &mu;M) e NVP-AEW541 (2, 4, 6, 8 e 10 &mu;M) e a viabilidade celular (MTT), apoptose (anexina V/PI e caspase 3), proliferação celular (Ki-67) e expressão/ativação proteica (Western blot) foram avaliadas. NT157 e OSI-906 foram testados em modelo murino de NMP knockin para JAK2V617F in vivo e ex vivo e em amostras de pacientes com mielofibrose primária. A análise estatística foi realizada pelo teste t de Student ou teste de Mann-Whitney. Em células Ba/F3 JAK2V617F, NT157 na dose &ge;0,4 &mu;M, reduziu significativamente a viabilidade e proliferação celular e induziu apoptose em todos os tempos de tratamento. OSI-906 reduziu a viabilidade de células Ba/F3 JAK2V617F a partir da dose de 10 &mu;M em 24 e 48 horas; e induziu a apoptose apenas na dose mais alta (40 &mu;M). NVP-AEW54 reduziu a viabilidade e aumentou a apoptose a partir da dose de 2 &mu;M em todos os tempos de tratamento (p<0,05). Resultados semelhantes foram encontrados na ativação da caspase 3 em células Ba/F3 JAK2V617F por western blotting. Em células Ba/F3 JAK2WT, com a presença de meio condicionado com IL3, todos os três inibidores afetaram o crescimento e induziram apoptose de maneira semelhante a célula mutada. NT157, OSI-906 e NVP-AEW54 reduziram a fosforilação/ativação de Irs1/2, Igf1r, Jak2, Stat3, Stat5 e P70s6k em células Ba/F3 JAK2V617F; NT-157 aumentou a fosforilação de Erk1/2 e não modulou Akt1/2/3; NVP-AEW541 não modulou Erk1/2. OSI-906 induziu autofagia a partir da dose de 5uM em células Ba/F3 JAK2V617F. NT157 (6,4&mu;M), OSI-906 (&ge;20 &mu;M) e NVP-AEW54 (&ge;6 &mu;M) ex vivo reduziram a viabilidade de células de camundongo expressando a forma mutada (V617F) ou selvagem da proteína JAK2. NT157 e OSI-906 reduziram a formação de colônia e inibiram a fosforilação de Igf1r e Stat3; NT157 aumentou a fosforilação de Akt1/2/3 e Erk1/2 em células de camundongo expressando a forma mutada (V617F) da proteína JAK2. NT157 não modulou os parâmetros hematimétricos e o tamanho do baço do modelo murino de NMP JAK2 V617F knockin. O tratamento com OSI-906 no modelo murino de NMP knockin para JAK2V617F resultou em redução dos progenitores hematopoéticos eritroides e aumento dos progenitores mieloides da medula óssea, mas não modulou os parâmetros hematimétricos. OSI-906 reduziu o crescimento tumoral no modelo de camundongo induzido por células Ba/F3 JAK2V617F. NT157 e OSI-906 reduziram a formação de colônia em amostras de sangue periférico de pacientes com mielofibrose. Em conclusão, OSI-906, NVP-AEW54 e NT157 apresentam efeitos antineoplásicos semelhantes em modelo de NMP JAK2V617F, porém foi observado variação dos efeitos celulares e moleculares de acordo com o inibidor testado. Os resultados dos estudos pré-clínicos com os inibidores testados reforçam a implicação da via IGF1R/IRS na patogênese da NMP JAK2V617F ao mesmo tempo que indicam o efeito multialvo das drogas. (AU)

• Processo FAPESP: 16/14049-0 - Investigação de mutações na via IGF1R/IRS em Neoplasia Mieloproliferativa e o efeito de inibidores farmacológicos desta via de sinalização em modelo murino knockin para a mutação JAK2V617F
• Beneficiário: Jaqueline Cristina Fernandes
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado