Importância da atividade secretora de macrófagos induzida pela Crotoxina sobre as funções de fibroblastos envolvidas com o processo de cicatrização. Estudos in vitro.

Autor(es)

Luiz Aurélio de Campos Crispin

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: São Paulo.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Ciências Biomédicas (ICB/SDI)
• Data de defesa: 2021-06-18

Membros da banca

Sandra Coccuzzo Sampaio Vessoni; Soraia Kátia Pereira Costa; Luis Roberto de Camargo Gonçalves; Thais Martins de Lima

• Orientador: Sandra Coccuzzo Sampaio Vessoni

Resumo

Nas últimas décadas, diversos estudos demonstraram a importante ação anti-inflamatória da CTX, avaliada diretamente sobre funções de neutrófilos e macrófagos, além do seu potencial como imunomodulador, particularmente sobre macrófagos relacionados à progressão tumoral e resposta inflamatória aguda e infecciosa. Esta capacidade imunomoduladora, de longa duração (até 14 dias) da CTX envolve a reprogramação fenotípica de macrófago, tornando-o mais pró- ou anti-inflamatório, dependendo da concentração da toxina e do estímulo do microambiente. Particularmente, com a presença local de macrófagos a produção e liberação dos mediadores químicos produzidos por eles, a migração e ativação de fibroblastos é intensificada, levando à deposição de grandes quantidades de fibronectina e colágeno, o que pode favorecer a fibrose. Portanto, o objetivo do presente projeto foi investigar a importância da atividade secretora de macrófagos induzida pela CTX sobre as funções de fibroblasto envolvidas com o processo de cicatrização. Para tanto, monoculturas de macrófagos diferenciados a partir da linhagem monocítica humana THP-1 foram incubados com diferentes concentrações da CTX, por 2 horas, lavados e incubados com meio RPMI 1640 fresco, por 24 horas e após esse período, fibroblastos humanos foram incubados com os sobrenadantes dessas monoculturas (cel:sobrenadante) ou com os macrófagos (cel:cel) para a determinação in vitro dos eventos dos fibroblastos, em diferentes períodos, tais como: 1) ensaio de proliferação; 2) ensaio de migração no modelo de Wound healing; 3) ensaio de migração em Câmara de transwell; 4) morfologia do citoesqueleto de actina dos fibroblastos e expressão de fibronectina e colágeno tipo I secretados por essas células, visualizados por microscopia confocal; 5) quantificação de 15-Epi-LXA4, por ensaio imunoenzimático (EIA) e 6) Análises proteômica e secretômica de macrófagos tratados com a toxina, por espectrometria de massas. Em conjunto, os resultados apresentados mostram que macrófagos tratados com CTX modulam a atividade funcional de fibroblastos (migração e proliferação e secreção de componentes de matriz), tanto no contato célula:célula, como por meio de mediadores secretados em seus sobrenadantes, de maneira mais pronunciada ao observado para anti-inflamatórios clássicos. Esse estudo contribuiu, portanto, para evidenciar a importância da capacidade imunomoduladora da CTX sobre eventos envolvidos com a cicatrização. (AU)

• Processo FAPESP: 17/23974-1 - Importância da atividade secretora de macrófagos induzida pela crotoxina sobre as funções de fibroblastos envolvidas com o processo de cicatrização. estudos in vitro
• Beneficiário: Luiz Aurélio de Campos Crispin
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado