MicroRNA-194 regula a carga parasitária e a produção de óxido nítrico dependente de IL-1β em células mononucleares do sangue periférico de cães com leishmaniose

Autor(es)

Sidnei Ferro Costa

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Araçatuba. 2023-04-27.
• Instituição: Universidade Estadual Paulista (Unesp). Faculdade de Medicina Veterinária. Araçatuba
• Data de defesa: 2023-03-23
• Orientador: Valéria Marçal Felix de Lima

Resumo

Os cães domésticos são os principais reservatórios urbanos de Leishmania infantum, o agente causador da leishmaniose visceral (LV). Na leishmaniose canina (CanL), a modulação da resposta imune do hospedeiro pode estar associada à expressão de pequenos RNAs não codificantes denominados microRNA (miR). A expressão do miR-194 aumenta em células mononucleares do sangue periférico (CMSP) de cães com leishmaniose com correlação positiva com a carga parasitária. Estudamos CMSP de 5 cães saudáveis e 28 cães com leishmaniose. A expressão basal do miR-194 foi analisada utilzando qPCR. As CMSP foram transfectadas com Mimic e Inibidor sintéticos do miR-194 e cultivadas a 37º C, 5% de CO2 por 48 horas. A expressão de possíveis alvos do miR-194 foi analisada: iNOS, NO, T-Bet, GATA3 e FoxP3 foram analisadas por citometria de fluxo; a expressão gênica de TRAF6 foi analisada por qPCR, e o nível das citocinas IL-1β, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-α, IFN-γ e TGF-β no sobrenadantes de cultura celular foi mensurada por Ensaio Imunoenzimático de Captura (ELISA). A carga parasitária foi analisada por citometria e qPCR. Ensaio funcional com Inibitor do miR-194 e bloqueio de IL-1β e avaliação da produção de NO também foram realizados. Transfecção com o mimic do miR-194 promoveu um aumento da carga parasitária. Não houve alterações significativas na expressão de T-bet, GATA3 ou FoxP3 com aumento ou inibição do miR-194. A inibição de miR-194 aumentou IL-1β e NO em CMSP de cães doentes, e o bloqueio de IL-1β após a inibição de miR-194 diminuiu os níveis de NO. Esses achados sugerem que o miR-194 é regulado positivamente em CMSP de cães com leishmaniose e regula positivamente a carga parasitária, possivelmente diminuindo a produção de NO dependente da IL-1β. Esses resultados aumentam nossa compreensão dos mecanismos moleculares de evasão da resposta imune pelo parasita e a identificação de possíveis alvos terapêuticos. (AU)

• Processo FAPESP: 19/14894-0 - MiRNA 194 na regulação da reposta imunológica de células mononucleares do sangue periférico na Leishmaniose Canina
• Beneficiário: Sidnei Ferro Costa
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado