Análise do papel de exopolissacarídeos e DNA extracelular no escape de Streptococcus sanguinis ao sistema comlemento

Autor(es)

Victor Aragão Abreu de Freitas

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Piracicaba, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Odontologia de Piracicaba
• Data de defesa: 2023-03-17

Membros da banca

Renata de Oliveira Mattos Graner; Marlise Inêz Klein; Antônio Pedro Ricomini Filho; Rodrigo Alex Arthur

• Orientador: Renata de Oliveira Mattos Graner; Lívia Araujo Alves

Resumo

Streptococcus sanguinis é uma espécie bacteriana comensal abundante da cavidade bucal, a qual é capaz de iniciar a colonização dos dentes por escapar da ação de anticorpos salivares S-IgA1 através da expressão de proteases de IgA1, e por produzir DNA extracelular (eDNA) e exopolissacarídeos (EPS) derivados da sacarose. Esta espécie é também comumente associada a infecções cardiovasculares oportunistas, o que sugere capacidade de escapar das funções de defesa da corrente sanguínea mediada pelo sistema complemento. O objetivo deste estudo foi investigar os papéis de eDNA, EPS derivados da sacarose e de IgA1-protease na capacidade de S. sanguinis de escapar do sistema complemento. Para isto, cepas mutantes knockout dos genes que codificam a protease de IgA1 (iga), a enzima piruvato oxidase requerida para a produção de eDNA (spxB) e a glicosiltranferase (gtfP) requerida para a síntese de EPS a partir da sacarose, foram obtidas a partir da cepa S. sanguinis SK36 (e respectivamente designadas SKiga, SKspxB e SKgtfP). As mutantes foram então comparadas com a cepa parental quanto à susceptibilidade à deposição de C3b e fagocitose por neutrófilos (PMN) isolados de sangue periférico humano, em ensaios de citometria de fluxo. Cinco cepas isoladas da cavidade bucal ou da corrente sanguínea foram também analisadas quanto à produção de eDNA e/ou EPS sob diferentes condições e quanto aos perfis de ligação à C3b. Os efeitos do tratamento bacteriano com DNAse I na deposição de C3b e na opsonofagocitose por PMN também foram analisadas em todas as cepas estudadas. A deleção de spxB e gtfP promoveu aumento significativo na deposição de C3b e na opsonofagocitose por PMN sob condições que promovem a produção de eDNA e de EPS, respectivamente (Kruskal Wallis seguido do teste de Dunn; p<0,05). A deposição de C3b e/ou opsonofagocitose por PMN também foram significativamente aumentadas nas cepas SK36 e SK160 que produziam maiores quantidades de eDNA após o tratamento com DNase I, comparadas às mesmas cepas não tratadas. Além disso, entre as cepas mais produtoras de EPS, o crescimento em meio livre de sacarose (para eliminar a síntese de EPS) promoveu maior deposição de C3b em comparação à mesma cepa cultivada na presença de sacarose (p<0,05). Não houve diferença estatisticamente significante na deposição de C3b ou na opsonofagocitose por PMN entre SKiga e SK36. Portanto, a produção de eDNA ou de EPS derivados da sacarose contribuem para o escape de S. sanguinis à imunidade mediada pelo sistema complemento, enquanto que a expressão de protease de IgA1 não afeta significativamente a susceptibilidade de SK36 ao sistema complemento (AU)

• Processo FAPESP: 18/12248-0 - Análise do papel de exopolissacarídeos e DNA extracelular no escape de Streptococcus sanguinis ao sistema complemento
• Beneficiário: Victor Aragão Abreu de Freitas
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado