Avaliação das propriedades fenotípicas de células cardíacas cultivadas em micropadrões

Autor(es)

Jennifer Adriane dos Santos

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: São Paulo.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Medicina (FM/SBD)
• Data de defesa: 2023-04-19

Membros da banca

Adriano Mesquita Alencar; Jonatas Bussador do Amaral; Anderson Zanardi de Freitas; Francisco Rafael Martins Laurindo

• Orientador: Adriano Mesquita Alencar

Resumo

Dentre os diversos problemas considerados quando estudamos as propriedades reológicas de células vivas, podemos citar a caracterização mecânica e a resposta das células cardíacas, em especial, os cardiomiócitos derivados de células-tronco pluripotentes induzidas humanas (hiPSC-CMs), tema com forte apelo científico e poucos trabalhos encontrados na literatura. É conhecido que a regulação ativa das forças celulares durante a adesão, desempenha um papel importante na determinação do tamanho, forma e estrutura interna das células. Para isso, foi criado um protocolo geral de aplicação, onde foram realizadas medidas de força de tração através de técnicas reológicas como a Microscopia de Força de Tração (TFM) e a aplicação de estimulação elétrica (EE) para sincronizar a contração dos hiPSC-CMs aderidos sobre os micropadrões (MPs), que consiste em um método de produção de padrões microscópicos para o confinamento de células, com o objetivo de entender os mecanismos funcionais nos quais as células comportam-se e respondem ao microambiente que a circunda. Para tanto, utilizamos substratos de poliacrilamida para produzir micropadrões de Geltrex (GTX) e Laminina (LAM), incorporados através de um molde de Polidimetilsiloxano (PDMS) para caracterizar o efeito desses estímulos aplicados nos hiPSC-CMs com o objetivo de avaliar a mecânica do fenótipo celular, através da determinação das propriedades de força de tração, poder de contração e morfologia dessas células. Neste estudo, foram estudadas um total de 72 células divididas em 8 grupos a seguir: (1) células cultivadas em MPs utilizando a matriz de LAM; (2) cultivadas em MPs utilizando GTX; (3) cultivadas em LAM sem MPs; (4) cultivadas em GTX sem MPs. Adicionalmente, foi utilizado o estimulador elétrico em cada grupo, perfazendo ao final, um total de 8 grupos estudados. O uso dos MPs ocasionou um aumento no grau de alinhamento dos hiPSC-CMs e após aplicar os estímulos elétricos a tração quadrática média dos hiPSC-CMs diminuiu em 87 % das células analisadas (AU)

• Processo FAPESP: 18/20910-5 - Avaliação das Propriedades Fenotípicas de Células Cardíacas Cultivadas em Micropadrões
• Beneficiário: Jennifer Adriane dos Santos
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado