Phage Display de peptídeos e de anticorpos: uma combinação para a engenharia de biofármacos para doenças com um componente angiogênico

Autor(es)

Caio Cesar Nogueira Cambui

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: São Paulo.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Conjunto das Químicas (IQ e FCF) (CQ/DBDCQ)
• Data de defesa: 2023-08-21

Membros da banca

Ricardo José Giordano; Daniela Sanchez Bassères; Nathalie Cella

• Orientador: Ricardo José Giordano

Resumo

Anticorpos são proteínas usadas pelo sistema imunológico para identificar e neutralizar corpos estranhos como bactérias, vírus ou células tumorais. O uso de anticorpos, especialmente anticorpos monoclonais, encontra aplicações que se estendem desde o seu uso como ferramentas científicas, até biofármacos para o tratamento das mais diversas doenças. A produção de anticorpos monoclonais, todavia, é um processo árduo. As principais técnicas para a produção dessas biomoléculas, como o hibridoma ou phage display de anticorpos são dependentes da imunização de animais, um fator limitante, especialmente se o antígeno a ser utilizado for pouco imunogênico, um antígeno próprio ou altamente tóxico. Nesse trabalho, estabelecemos um método alternativo para a produção racional de anticorpos utilizando uma combinação de phage display de peptídeos e phage display de anticorpos. A primeira técnica permite o isolamento de ligantes bioativos. Esses ligantes podem então ser inseridos em estruturas de anticorpos nas regiões de reconhecimento do antígeno para a produção de bibliotecas de anticorpos direcionados contra o alvo em estudo, permitindo, deste modo, a seleção de imunoglobulinas específicas e direcionadas a regiões biologicamente importantes do alvo. Demonstramos a viabilidade desse processo isolando anticorpos anti-Tie1. Tie1 é um receptor tirosina quinase expresso em células endoteliais que é importante no processo de formação de vasos sanguíneos a partir de vasos pré-existentes (angiogênese). Esse receptor pertence a uma família composta por apenas um outro membro, o receptor Tie2. Apesar do extenso conhecimento a respeito dos ligantes e vias de sinalização ativadas por Tie2, Tie1 continua a ser, até o momento, um receptor órfão. Utilizando a tecnologia de phage display de peptídeos, isolamos um ligante de Tie1 capaz de inibir a angiogênese em um modelo murino de retinopatia induzida por oxigênio. Esse peptídeo foi então utilizado como base para a construção debibliotecas de anticorpos direcionados contra a porção extracelular de Tie1. Mostramos que nosso método é eficiente para o isolamento de anticorpos monoclonais no formato de single chain (scFv). Além disso, utilizando a tecnologia de phage display de peptídeos, isolamos um peptídeo contra o receptor gp130, um receptor transmembrânico que atua na inflamação, na angiogenese e em diversos outros processos biológicos. Esse peptídeo poderá ser explorado, futuramente, em vias relacionadas à resposta imune, inflamação, assim como na angiogênese. (AU)

• Processo FAPESP: 19/19620-5 - Phage display de peptídeos e de anticorpos: uma combinação para a Engenharia de biofármacos para doenças com um componente angiogênico
• Beneficiário: Caio Cesar Nogueira Cambui
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto