Heterogeneidade relacionada ao câncer de mama representada em miRNAs circulantes e vesiculares: resultados de ensaios de alto rendimento e prova de conceito para seleção de vesículas extracelulares derivadas de tumor

Autor(es)

Alexis German Murillo Carrasco

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: São Paulo.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Medicina (FM/SBD)
• Data de defesa: 2023-12-04

Membros da banca

Roger Chammas; Edna Teruko Kimura; Camila Motta Venchiarutti Moniz

• Orientador: Roger Chammas

Resumo

O câncer de mama conquistou recentemente o título de tipo de câncer mais diagnosticado em todo o mundo, com destaque para as mulheres diagnosticadas antes dos 40 anos (câncer de mama jovem). Independentemente da idade, embora a classificação baseada em perfis imunohistoquímicos seja um amplo sistema de triagem, prognóstico e predição de tratamento, os pacientes com CM necessitam de informações adicionais para receber tratamento mais adequado. Então, foi proposto que as características do tumor pudessem ser coletadas a partir de amostras de sangue (biópsias líquidas sistêmicas). No plasma sanguíneo, os microRNAs (miRNAs) são ferramentas reguladoras que podem ser coletadas e medidas como material circulante livre de células ou em vesículas extracelulares (VEs). Nesta tese, exploramos o miRNoma do conteúdo circulante (cf-miRNA) e vesicular (EV-miRNA) de pacientes com CM classificados nos principais grupos imuno-histoquímicos (Luminal A, Luminal B, Luminal HER2, HER2+ e Triplo-negativo). Investigamos duas coortes diferentes de amostras de CM em experimentos de EV-miRNA para avaliar protocolos técnicos e descobertas consistentes. Percebemos que o cf-miRNA é suscetível à contaminação com outras fontes circulantes, como a hemólise. No entanto, tanto o cf-miRNA quanto o EV-miRNA, são fontes informativas para determinar diferenças de expressão de miRNA entre os subtipos de BC. Os níveis circulante e vesicular dos microRNAs hsa-miR-197-3p e hsa-miR-5001-5p diferenciam pacientes Triplo-negativo e Luminal HER2, respetivamente. Somente na carga vesicular, hsa-miR-411-5p caracteriza pacientes Luminal HER2, enquanto hsa-miR-1266-5p, hsa-miR-584-5p, hsa-miR-2053, hsa-miR-525-5p e hsa-miR-642a-5p distinguem pacientes jovens com câncer de mama Triplo-negativo. Junto com esses experimentos, encontramos diversos miRNAs desregulados, alguns associados a vias associadas a tumores, mas outros relacionados a processos antitumorais. Então, realizamos também experimentos com uma proteína ligante de glicanos produzida em jaca (Artocarpus integrifolia) para demonstrar que esta lectina pode marcar seus alvos, o antígeno Tn relacionado ao tumor e seus derivados, em tecidos fixados em formalina e embebidos em parafina (FFPE) e linhagens celulares de CM, bem como VEs isoladas de pacientes com CM. Observamos que 10% do total de VEs circulantes são Tn+, demonstrando assim ser possível selecionar frações de VEs plasmáticas por proteínas em sua superfície usando estratégias de afinidade (AU)

• Processo FAPESP: 19/05583-0 - Enriquecimento de microvesículas extracelulares STn/Tn+ derivadas de tumor para avaliar marcadores baseados em miRNA em pacientes com Câncer de Mama
• Beneficiário: Alexis Germán Murillo Carrasco
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto