Texto completo
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| Autor(es): |
Patricia Maria Bergamo Favaro
Número total de Autores: 1
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| Tipo de documento: | Tese de Doutorado |
| Imprenta: | Campinas, SP. |
| Instituição: | Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Ciências Médicas |
| Data de defesa: | 2006-02-15 |
| Membros da banca: |
Sara Teresinha Olalla Saad
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| Orientador: | Sara Teresinha Olalla Saad |
| Resumo | |
Forminas são proteínas relacionadas com o controle de morfogênese, diferenciação embrionária, citocinese, polaridade e sobrevivência celular. São conservadas entre várias espécies, incluindo fungos, plantas, moscas de fruta, camundongos e humanos, apresentando múltiplos domínios. Com o objetivo de descrever novas proteínas, através das informações geradas pelo projeto Genoma do Câncer Humano, uma parceria entre a Fapesp e o Instituto Ludwig, duas EST humanas (expression sequence tags) foram identificadas com homologia aos genes da família das forminas. O objetivo do presente estudo foi obter a seqüência completa do RNAm deste novo gene e a estrutura primária da proteína para estudos de localização, interações com outras proteínas e estudos funcionais da mesma. Para obter a seqüência completa do RNAm, foram realizadas buscas no banco de dados genômico do NCBI (National Center for Biotechnology lnformation) e usadas técnicas de biologia molecular. Assim, após a obtenção da seqüência completa do novo RNAm foi possível o depósito do mesmo no banco de dados do portal NCBI, com o nome de Formina Leucocitária Humana (número de acesso AY278319). Posteriormente, baseando-se na nomenclatura de novos genes e proteínas, aprovada pelo Gene Nomenclature Committee RUGO, o novo gene foi renomeado formin-like 1, doravante FMNL 1. A produção de um anticorpo policlonal específico para a proteína codificada pelo FMNL1, permitiu o estudo de sua expressão em diversos tecidos humanos. Através da técnica de Western Blotting, foi observada expressão preferencial em células neoplásicas, especialmente linfóides. Dentre os tecidos normais, foi detectada expressão apenas em células mononucleares de sangue periférico, em linfonodo e preferencialmente em células CD19- quando comparadas com células CD19+ de tonsilas normais. Dentre as linhagens celulares neoplásicas, a expressão foi maior em MOLT-4 e Jurkat, quando comparadas com outras linhagens mielóides, indicando expressão preferencial da proteína em neoplasias linfóides. Além disso, a alta expressão da proteína foi observada em células mononucleares de sangue periférico de 20 pacientes com. LLC (leucemia linfóide crônica), quando comparadas com células mononucleares de sangue periférico de indivíduos normais. Quando a expressão da proteína FMNL1 foi estudada em diferentes tipos histológicos de Linfomas não-Hodgkin (LNH) e em linfonodos reativos, novamente foi observada a expressão preferencial no tecido neoplásico em relação ao tecido normal, sendo os LNH- T aqueles com expressão mais significativa. Esta nova proteína FMNL1 localiza-se no citoplasma, conforme verificado pela microscopia confocal e confirmado através da técnica de separação de frações. Das interações desta proteína, foi detectada a associação de FMNL 1 com AKT, sendo que essa associação é independente da ativação de AKT. Também foi observado que a ativação da via das caspases em duas linhagens celulares neoplásicas levava à diminuição da expressão da proteína FMNL 1. Em síntese, a expressão preferencial da proteína FMNL1 em tecidos neoplásicos línfóides e a sua associação com AKT, sugere a sua participação na sobrevivência dessas células e, possivelmente, na fisiopatologia das neoplasias hematológicas (AU) | |
| Processo FAPESP: | 02/00217-5 - Clonagem e caracterizacao de um novo gene humano relacionado com a familia das forminas, com papel na reorganizacao do citoesqueleto. |
| Beneficiário: | Patricia Maria Bergamo Favaro |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Brasil - Doutorado |