Estudo da interação entre Oxido Nitrico e gene RAS em linhagens leucemicas mieloides

Autor(es)

Marcelo Mendes Brandão

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Ciências Médicas
• Data de defesa: 1999-03-05

Membros da banca

Sara Teresinha Olalla Saad; Hugo Pequeno Monteiro; Helena Zerlotti Wolf Grotto

• Orientador: Sara Teresinha Olalla Saad

Resumo

Oncogenes são genes que afetam o crescimento e desenvolvimento celular normal. A maioria dos oncogenes se constitui de formas modificadas de genes normais, denominados de protoncogenes. o protoncogene RAS, encontrado em diversos organismos, codifica uma proteína com atividade de ligação à Guanina trifosfato (GTP) normal, sem atividade de GTPase. O gene RAS mutante é encontrado em muitos seres humanos com cânceres do pulmão, cólon e pâncreas; o produto deste gene mutante é responsável pela divisão incontrolada de células cancerosas. O óxido nítrico é uma importante molécula sinalizadora sintetizada em diversos tecidos humanos, por proteínas codificadas em uma família de genes da NO sintase . A produção de NOS pode ser induzida por diversas substâncias tais como, endotoxinas, citocinas, lipopolissacarídeos bacterianos (LPS) e por 1a-interleucina. O NO ativa a p21ras em células T humanas, como pode ser observado pelo aumento da ligação GTP-p21ras.Recentemente, um grupo de pesquisadores identificou o sítio de interação entre NO e p21ras que é responsável pela iniciação da transmissão do sinal. O presente trabalho teve como objetivo analisar a interação do NO com a proteína p21RAS em células de linhagens leucêmicas mielóide (U937, HL60 e K562) e estudar a expressão do RAS e da iNOS em pacientes com Leucemia Mielóide Aguda.Linhagens leucêmicas foram incubadas com o lipopolissacarídeo (LPS) e interferon y (IFNy) indutores da NO sintase. A expressão da iNOS e do RAS foi analisada através de imunocitoquímica, western blotting e citometria de fluxo. Para se confirmar o aumento da atividade do RAS foi analisada a fosforilação das MAPK p42/44. A dosagem de NO dissolvido no meio foi feita utilizando-se o reagente de Griess. Analisando os resultados obtidos foi possível chegar às seguintes conclusões: 1. Células de leucemia mielóide aguda apresentam superexpressão de iNOS. 2. O aumento da expressão da iNOS, em pacientes com LMA, é independente da p21 RAS. 3. Em linhagens leucêmicas com mutação no N-RAS houve maior - expressão da iNOS em condições basais e redução do NO após estímulo com LPS. 4. As linhagens leucêmicas K562, U937 e HL60 apresentam uma iNOS insensível à estimulação por LPS e IFNy, nos tempos e concentrações apresentadas. 5. A linhagem K562 possui RAS susceptível a aumento da sua expressão por estímulos de LPS e LPS + IFNy nos tempos e concentrações apresentadas (AU)

• Processo FAPESP: 97/01451-1 - Estudo da interação do óxido nítrico com a p21ras em linhagens leucêmicas mieloide
• Beneficiário: Marcelo Mendes Brandao
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado