Análise da expressão gênica da fase inicial de diferenciação de células CD34+ utilizando a análise serial da expressão gênica (SAGE)

Resumo

O processo de proliferação e diferenciação das células hematopoéticas é um mecanismo complexo que depende da interação entre células hematopoéticas entre si e entre fatores de crescimento celular além, da presença de proteínas nucleares e citoplasmáticas e da ação de vários tipos de genes. Com o objetivo de caracterizarmos quais fatores genéticos atuam na diferenciação de células CD34 nas linhagens eritrocitárias e granulocíticas, realizaremos o estudo da expressão gênica dessas células utilizando a técnica da análise serial da expressão gênica (SAGE). No início da diferenciação de células CD34 em linhagens eritroide e granulocítica, a cultura celular será interrompida e procederemos com a extração do RNAm para estudo molecular. Uma alíquota das células CD34 continuarão em cultura in vitro para confirmarmos que o processo de diferenciação ocorreu conforme o esperado. Com o uso da técnica de SAGE, serão gerados os "tags". Com a contagem e identificação dos "tags", um panorama compreensivo da expressão gênica será obtido. Análises comparativas serão realizadas entre os transcriptomas de células CD34 em início de diferenciação em eritrócitos e granulócitos. A identificação de genes normalmente expressos ou super ou sub-expressos nestas condições auxiliarão no entendimento dos mecanismos moleculares envolvidos na diferenciação celular. (AU)