Avaliação da expressão de proteínas transportadoras de glicose (gluts) central e perifericamente em ratos resistentes à insulina

Resumo

Um dos principais mecanismos geradores de resistência à insulina é a alteração do transporte de glicose via expressão gênica alterada do GLUT4 (proteína transportadora de glicose sensível à ação da insulina) em tecidos musculares e adiposo. Em alguns casos, a alteração na expressão de GLUT4 pode ser compensada com aumentos na expressão de GLUT1 (isoforma transportadora de glicose no estado basal). Vários autores têm encontrado diferenças significativas nos conteúdos de mRNA e de proteína GLUT4 em estados de resistência à insulina, sugerindo um mecanismo de regulação pós-transcricional do gene que é estado e tecido-específicas. Agudamente pode-se induzir um quadro de resistência insulínica através da imposição de jejum alimentar. Já foi demonstrado em ratos que o jejum de 48 horas está associado com uma rápida e progressiva redução na atividade de transporte de glicose insulino-estimulada em células adiposas em decorrência de alterações tanto no número de transportadores de glicose como em sua atividade intrínseca. Assim a primeira questão do projeto concentra-se em avaliar o controle pós-transcricional da expressão de GLUT1 e de GLUT4 em tecido muscular esquelético de ratos jejuados por 48 horas, constituindo a análise periférica da expressão de GLUTs. Sabe-se que o cérebro requer constante transporte de glicose da circulação periférica para as células neuronais. Ele tem uma participação fundamental no monitoramento da glicemia através de neurônios glico-sensores cerebrais, próximos a áreas do terceiro ventrículo e hipotálamo. Nestes neurônios os transportadores de glicose (GLUTs) devem ser importantes para permissão da passagem de glicose para áreas cerebrais envolvidas no controle de ingestão alimentar e, portanto, informando sobre estados glicêmicos e ajudando no manejamento da homeostasia glicídica. O segundo objetivo do projeto consiste em avaliar a expressão de GLUT1 e de GLUT4 em áreas hipotalâmicas envolvidas no controle de ingestão alimentar: núcleo arqueado, área hipotalâmica lateral, área pré-fornicial adjacente ao fórnix, hipotálamo ventromedial de animais jejuados para melhor compreensão da participação central destas proteínas transportadoras de glicose na resistência à insulina. Assim as técnicas utilizadas para os dois propósitos envolverão a: 1) quantificação dos conteúdos de rnRNA (RT-PCR) e de proteína (Western blotting) do GLUT1 e do GLUT4 em músculo esquelético solear; 2) avaliação da eficiência de tradução (ensaio "in vitro") dos GLUTs; 3) avaliação da estabilidade das moléculas de rnRNA dos GLUTs (ensaio com RNAse H); 4) quantificação do conteúdo de PABP (Western blotting); 5) localização da proteína PABP no citoesqueleto da célula (análise por imunohistoquímica); 6) avaliação da organização estrutural do citoesqueleto da célula (análise imunohistoquímica da actina-F). 7) semiquantificação do conteúdo de mRNA de GLUT1 e de GLUT4 (RT-PCR) áreas encefálicas. (AU)