Deteccao molecular quantitativa atraves de pcr competitiva em cianobacterias hepatotoxicas.

Resumo

Os corpos d'água brasileiros vêm apresentando um problema de Saúde Pública devida à presença de cianobactérias potencialmente tóxicas, principalmente do gênero Microcystis que são capazes de produzir a hepatotoxina microcistina. A microcistina é codificada por um agrupamento de genes denominados mcys, cuja presença é restrita a cepas tóxicas. Com isso cepas tóxicas e não tóxicas podem ocorrer na mesma população sendo que a distinção entre elas não é possível através de caracteres morfométricos. Sendo assim, a abordagem molecular para detecção da potencialidade de produção da microcistina por cianobactérias é extremamente útil. Este estudo objetiva avaliar metodologia molecular de Polymerase Chain Reaction (PCR) competitiva para detecção quantitativa-de Microcystis potencialmente hepatotóxicas. Serão preparados cultivos compostos de células tóxicas e não tóxicas em razão conhecida originados de linhagens de Microcystis e posterior realização de PCR competitiva a fim de verificar a concordância da técnica de PCR competitiva e a contagem de células em microscópio óptico na quantificação de células totais utilizando o primer cpcBA, e tóxicas utilizando o primer mcyB F/R. Pretende-se também aplicar esta metodologia em amostras ambientais de corpos d’água brasileiros. Desta maneira espera-se analisar o potencial da metodologia na quantificação da proporção de células de Microcystis tóxicas e não tóxicas de corpos d’água. Esta técnica é baseada na co-amplificação do fragmento do gene alvo e de um DNA competidor de concentração conhecida, sendo que ambos podem ser amplificados pelo mesmo primer. PCR competitiva apresenta potencial de ser integrada na rotina de monitoramento de mananciais utilizados para abastecimento público, pois além de não depender da produção da toxina no momento da análise, da categoria taxonômica e da isoforma da toxina é quantitativa e preditiva. (AU)