Estudos conformacionais de peptideos correspondentes a regiao n-terminal de citolisinas sticholisina i e sticholisina ii em solucao e em presenca de membranas modelo.

Resumo

Sticholisinas I e II (Stl e Stll, PM~20 kDa), citolisinas da anêmona marinha Sticholidacta heliantus, pertencem à família das actinoporinas. Propõe-se que o mecanismo de ação dessas toxinas consiste na formação de poros em membranas biológicas (levando à Use celular) e modelo, sendo o fosfoesfigolipídio esfingomlelina (SM) seu receptor putativo. Estudos com as sticholisinas e outra actinoporina, a equintoxina II, sugerem que a região N-terminal das toxinas é essencial para a formação do poro, já que é a única região que pode se movimentar com certo grau de liberdade sem que o enovelamento global seja afetado. É proposto que essa região penetra na membrana, formando um poro constituído provavelmente de quatro monômeros da toxina. Estudos espectroscópicos (dicroísmo circular, CD, e infra-vermelho com transformada de Fourier, FTIR) mostraram que ocorre um aumento de estrutura secundária quando St II se liga a bicamadas lipídicas. Com o objetivo de elucidar a estrutura molecular e o mecanismo de formação do poro foram sintetizados peptídeos correspondentes à região N-terpinal de St 1 e St II com base na suposição de que esses fragmentos poderiam reproduzir a conformação que possuem na proteína. Espectros de CD e fluorescência serão obtidos a fim de investigar o papel da composição lipídica na interação peptídeo-membrana. Estudos de ressonância paramagnética eletrônica (RPE) serão realizados com um peptídeo contendo o marcador de spin ácido 2,2,4,4-tetrametil-N-oxil-amino-4-carboxílico (TOAC). Será também investigado o efeito da interação peptídeo-membrana sobre a organização molecular dos lipídios na bicamada através da análise dos espectros de RPE de marcadores de spin lipídicos intercalados na membrana. (AU)