Obtenção de mutantes de Streptomyces clavuligerus e otimização de condições de cultivo para a produção de cefamicina C

Resumo

A presente proposta se insere em Projeto Temático (Fapesp 05/55079-4) direcionado ao estudo das etapas necessárias ao desenvolvimento de tecnologia de produção de compostos bioativos de Streptomyces. Neste Temático, ênfase especial tem sido direcionada à cefamicina C (CefC), um antibiótico ²-lactâmico sintetizado por S. clavuligerus, com a proposição de trabalhos relacionados a alternativas de processo global de produção, desde o melhoramento da linhagem produtora e desenvolvimento de bioprocessos e biorreatores, até sistemas de separação, extração e purificação. Neste contexto, o presente projeto propõe a obtenção de mutantes com maior potencial de produção de CefC a partir de mutagênese clássica da linhagem selvagem S. clavuligerus ATCC 27064 com o agente químico metil metano sulfonato (MMS). Este composto é um potente alquilante, adequado para uso em estreptomicetos, cujo DNA contém grande quantidade de bases G+C. Colônias isoladas dos mutantes serão inicialmente submetidas a seleção qualitativa (bioensaios de difusão em agar) e a capacidade produtiva dos mais promissores será avaliada por meio de cultivos submersos em frascos agitados, em meio complexo solúvel. A seleção de nutrientes do meio e os critérios de adição de precursores, cofatores e/ou indutores da rota biossintética de CefC, serão investigados de acordo com metodologia de planejamento experimental. Os resultados serão avaliados através de análise de superfície de resposta e as melhores condições testadas em maior escala (reator de bancada), comparando-se os dados com os da linhagem selvagem e também de um mutante espontâneo melhor produtor, S. clavuligerus DSMZ 41826 (Vining et al. 1987) utilizado em outros trabalhos inseridos no Projeto Temático supracitado. (AU)