Caracterização estrutural e funcional de enzimas envolvidas na biossíntese e acúmulo de sacarose em cana-de-açúcar

Resumo

A cana de açúcar é uma das mais importantes espécies vegetais cultivadas em todo o mundo, principalmente nas regiões tropicais e sub-tropicais, com uma área maior que 20 milhões de hectares em 101 países. O Brasil é o maior produtor participando com 25% da produção. As espécies de cana de açúcar são provenientes do Sudeste Asiático e têm uma grande importância econômica já que por séculos é a principal matéria prima para a fabricação do açúcar e recentemente do etanol, uma fonte de energia renovável. Neste trabalho foram selecionadas cinco proteínas envolvidas na biossíntese e acúmulo de sacarose em cana de açúcar (UDP-glicose pirofosforilase, sacarose sintase, sacarase fosfato fosfatase, sacarose fosfato sintase e invertase) com o objetivo de elucidar a estrutura tridimensional e a função exercida no metabolismo de sacarose. Os genes que codificam as proteínas citadas serão amplificados por meio da técnica de PCR em termocicladores localizados no Laboratório de Genônima Funcional (Instituto de Biologia - Unicamp) e clonados para expressão em sistema procarioto ou eucarioto. As proteínas deverão ser purificadas por métodos cromatográficos para a realização dos ensaios de cristalização e SAXS. Ensaios de PCR em tempo real para análise da expressão gênica e ensaios de interação proteína-proteína (duplo-híbrido) e cinética enzimática serão pertinentes para analisar a ação das proteínas durante o processo de biossíntese e acúmulo de sacarose em cana de açúcar.