Regulacao da expressao do gene slc2a4 por insulina e atividade contratil: envolvimento de diferentes fatores transcricionais.

Resumo

Sabe-se que a resistência à insulina envolve redução na expressão do gene SLC2A4 (que codifica o transportador de glicose GLUT4) em músculo esquelético, principal território captador de glicose no organismo. Por isto, o conhecimento do mecanismo transcricional desse gene tornou-se alvo importante de estudo. Sabe-se também que no promotor do gene SLC2A4 existem domínios de ligação para importantes fatores transcricionais tais como MEF2, HIF-1 alfa, TR e NF-kappa B. Considerando-se que insulina e atividade contrátil são capazes de modular a atividade dos fatores citados, em outros sistemas celulares e genes alvos, postulamos que estes fatores desempenhem importante papel regulador na expressão do SLC2A4 em músculo, em resposta à insulina e à contração. Nosso objetivo é investigar a expressão do SLC2A4 em músculo esquelético in vitro (isolando outros moduladores) em resposta a insulina e a atividade contrátil, e o envolvimento dos fatores transcricionais citados nas regulações observadas. Será investigado, em músculos estimulados a contrair ou incubados com insulina: 1) a expressão do SLC2A4 (Northern blotting); 2) a expressão dos fatores trancricionais (RT-PCR); e 3) a atividade transcricional desses fatores sobre o gene SLC2A4 (ensaio de mobilidade eletroforética - EMSA, também conhecido como gel shift). Quando for necessário discriminar entre as isoformas de uma mesma família de fatores transcricionais, será utilizada a técnica de super-shift com anticorpos específicos. Espera-se demonstrar a participação desses fatores transcricionais no aumento do conteúdo de proteína GLUT4 em músculo, fenômeno este que é fundamental para aumentar a sensibilidade tecidual à insulina, contribuindo para a homeostasia glicêmica. (AU)