Proteomica funcional: estudo do papel da nucleofosmina na gliomagenese

Resumo

Atualmente, câncer está sendo altamente reconhecido como uma doença das proteínas, de tal forma que, a proteômica pode representar um atalho entre mudanças no genoma e desenvolvimento de câncer. As células gliais podem sofrer mutações para formar células tumorais gliais ou gliomas, dentre os quais 70% originam de astrócitos. Nós desenvolvemos um estudo proteômico em amostras de astrocitomas cirurgicamente removidas de pacientes, baseado em eletroforese bidimensional (2DE) e espectrometria de massas (MALDI-TOF e ESI-MS/MS), para identificar proteínas diferencialmente expressas na progressão tumoral, de acordo com o aumento dos graus de malignidade (graus II, III e IV). As proteínas identificadas foram nucleofosmina (NPM), anexina I, anexina V, peptidil-prolil cis-trans isomerase e alfa-cristalina cadeia B e apresentaram correlação com os estádios de astrocitomas. A proteína NPM apresentou níveis de expressão aumentados durante a evolução de astrocitomas, e demonstrou ter uma correlação direta com a progressão tumoral, que foi confirmada por sondagem de amostras de pacientes por anticorpo monoclonal anti-NPM através de western blot e por microarranjo de DNA. Na presente proposta, pretendemos estudar, através de metodologia proteômica, o papel desempenhado por NPM em linhagens celulares T98G e U87MG, derivadas de glioblastoma multiforme (grau IV). Para isso iremos correlacionar mudanças do proteôma com proliferação, migração celular e apoptose sob estimulo de EGF e seu efeito sobre os níveis de NPM, bem como, o efeito do silenciamento da expressão de NPM por RNA de interferência (RNAi). Isto poderá demonstrar as proteínas que são dependentes de/ou agem sobre NPM. Também, nós continuaremos os estudos proteômicos de amostras de pacientes para mais 5 amostras de cada grau de malignidade, utilizando estratégia de 2DE e complementando com shotgun peptide sequencing (SPS) cuja abordagem experimental será delineada neste projeto, com o objetivo de estender a identificação de novos biomarcadores e alvos para intervenção terapêutica. (AU)