Shotgun proteomics em estudos de glioma, nas interações de complexos protéicos com nucleofosmina e no proteoma/fosfoproteoma de linhagens celulares derivadas de glioblastoma multiforme (GBM) estimuladas por EGF

Resumo

Gliomas são os mais malignos dos tumores de cérebro, pois são muito heterogêneos, apresentam características como alta proliferação celular, hiperplasia, áreas necróticas e extensa formação de novos vasos sanguíneos. Entre ele, os astrocitomas correspondem a 60% dos tumores de cérebro e afetam geralmente a população adulta, sendo o prognóstico de sobrevida ruim, não passando de 12-14 meses de vida, pois apresentam tendência à recorrência e progressão maligna, não respondendo aos tratamentos. Estes são, em geral, muito agressivos e incluem ressecção cirúrgica, radioterapia e quimioterapia. Nosso grupo, recentemente, demonstrou a alteração das proteínas nucleofosmina e RKIP em glioblastoma multiforme (GBM). Estas proteínas estão envolvidas em duas vias de sinalização celular, PI3K/AKT/mTOR e RAS/RAF/MAPK, importantes para a formação de glioma e posicionadas "downstream" ao receptor de EGF. Na presente proposta pretendemos investigar, utilizando estratégia proteômica: 1) tumores de astrocitomas e oligodendrogliomas; 2) proteoma de linhagens celulares derivadas de GBM e correlacionar algumas proteínas com ensaios de proliferação, migração e apoptose; 3) efeito da estimulação por EGF na mudança do fosfoproteoma de linhagens celulares derivadas de GBM; 4) interações de complexos multi-protéicos tendo como alvo central as interações proteína-proteína com nucleofosmina (NPM1). Para alcançar esses objetivos, nós utilizaremos análise proteômica quantitativa através da marcação com isóbaros de iTRAQ e de incorporação de isótopos de aminoácidos estáveis (SILAC). Com a estratégia proteômica utilizando iTRAQ pretendemos estudar proteínas diferencialmente expressas em astrocitomas de grau II (4 casos); GBM de curta sobrevida <12 meses (4 casos); GBM de longa sobrevida >16 meses (4 casos); oligodendroglioma grau II (4 casos) e oligodendroglioma anaplástico (4 casos) comparados a um "pool" de amostras não tumorais (9 pacientes). Com a estratégia proteômica utilizando a incorporação metabólica de SILAC, nós investigaremos o fosfoproteoma e alterações do proteoma das linhagens U87MG e T98G estimuladas com EGF. Desta forma, esperamos contribuir para a geração de conhecimentos em câncer, avançar na tecnologia de análise proteômica e consolidar nossos estudos iniciais na progressão tumoral de glioma. (AU)