Mecanismo de solubilização das novas isoformas da enzima conversora de angiotensina I: liberação proteolítica (secretases) ou splicing alternativo do RNAm

Resumo

A Enzima Conversora de Angiotensina I (ECA) é uma zincometaloprotease com ação importante na patogênese das várias doenças cardiovasculares. Em estudos de nosso grupo verificou-se um perfil diferente de isoformas da ECA nas urinas de ratos e/ou indivíduos normotensos quando comparados a ratos e/ou indivíduos hipertensos, nos quais foi detectada uma isoforma N-domínio de 90/80 kDa. Esta isoforma é um possível marcador genético de hipertensão, a qual é segregada. O mesmo perfil encontrado nas urinas se repete nas células mesangiais e nos tecidos de ratos Wistar (normotensos) e SHR (hipertensos). Além desta isoforma de 90/80 kDa, uma outra isoforma da ECA N-domínio de 65 kDa foi também descrita. Sugere-se que mecanismos de solubilização da ECA somática possam estar envolvidos na formação destas isoformas por liberação proteolítica com envolvimento de uma secretase ou por splicing alternativo do RNAm. O objetivo deste trabalho, será verificar a origem destas novas isoformas. Para este estudo, utilizaremos cultura de células mesangiais primárias de ratos Wistar e SHR, verificando primeiramente a existência de uma ou mais secretases através da utilização de substratos fluoro gênicos e com posterior caracterização bioquímica e molecular da enzima. Paralelamente investigaremos a existência de RNAm que codifique para essas novas isoformas, utilizando inicialmente técnicas de PCR e análise de bioinformática. Este estudo poderá esclarecer se as diferenças encontradas entre indivíduos (e/ou ratos) normais e hipertensos se devem ao gene da própria ECA ou se existiria uma outra enzima que por sua vez estaria sendo regulada por um gene relacionado à hipertensão. (AU)