Caracterização da função da proteína ISG95 no metabolismo de RNA e de seu papel na resposta à infecção viral

Resumo

A resposta imune por IFN do tipo I apresenta papel fundamental no combate às infecções virais, sendo um dos principais mecanismos de imunidade inata ativados na célula logo no começo da infecção. A célula reconhece o vírus e entra em um estado antiviral, sinalizando e ativando genes efetores, chamados ISGs (interferon stimulated genes), responsáveis por combater a infecção de diferentes formas. A proteína ISG95, recém identificada, é uma das proteínas cujo papel na resposta por IFN deve ser fundamental, mas cujo conhecimento ainda é escasso. Em estudo anterior, foram delimitados quatro domínios funcionais da ISG95 e foi caracterizado sua interação com RNA, a RNA polimerase II e com uma proteína que apresenta similaridade com MUT-7 de Caenorhabditis elegans que participa da maquinaria de RNAi. Porém as funções que a ISG95 desempenha ainda não estão inteiramente claras, sendo possível que ela participe nos processos de splicing e/ou de RNAi. Dessa forma, propomos o estudo tanto funcional quanto estrutural desta proteína, olhando para seu papel na infecção viral, a fim de se detalhar suas funções. Em trabalho anterior foram gerados baculovírus recombinantes para expressão da ISG95 em células de inseto. Neste projeto utilizaremos este sistema de expressão para produzir ISG95 recombinante para realizar estudos bioquímicos e estruturais, que ajudarão no entendimento das funções de cada um de seus domínios. Além disso, a expressão em cultura de células humanas permitirá o estudo de suas interações com outras proteínas celulares, para determinar se apresenta função associada ao spliceossomo ou à maquinaria de RNAi. A imunoprecipitação dessa proteína expressa em células humanas permitirá ainda identificarmos por espectrometria de massa outras proteínas de interação, que podem ser alvos de seus domínios ou ajudar a proteína a desempenhar suas funções. Por fim, estudaremos as relações da ISG95 durante a infecção viral, usando o vírus respiratório sincicial humano (HRSV) como modelo, o qual se sabe que inibe a resposta por IFN. Dessa forma, poderemos testar se com a super expressão de IRG95 é possível reverter esse quadro e favorecer a célula a eliminar o vírus. (AU)