Textura cromatínica, anomalias cromossômicas e morte celular em condições de inibição de deacetilases de histonas em células HeLa e 3T3

Resumo

Nas células eucarióticas a cromatina resulta da organização de complexos nucleoproteicos em nucleossomos e destes em níveis superiores de organização. A dinâmica funcional da cromatina está especialmente relacionada a modificações nas histonas e no DNA e ação de RNAi. Acetilações e deacetilações são algumas formas de modificações das histonas. Deacetilases que atuam especialmente sobre as histonas H3 e H4 acham-se com frequência associadas ao silenciamento gênico e sua inibição relacionada à expressão gênica. Há um interesse atual em se conhecer como a modificação de histonas ou sua inibição afetam os níveis de organização e supraorganização da cromatina e a fisiologia celular. Como o ácido valproico (VPA) é um potente inibidor de deacetilases de histonas, busca-se no presente trabalho estudar seu efeito sobre a supraorganização cromatínica, as anomalias cromossômicas e a morte celular em dois modelos, células HeLa e 3T3, usando-se procedimentos de microscopia e análise de imagem. Resultados obtidos após diferentes concentrações e tempos de tratamento com VPA terão como controle positivo o tratamento com tricostatina A (TSA). No caso das células 3T3, este estudo será precedido por investigação de viabilidade celular com os testes de MTT e de exclusão do Trypan Blue após tratamentos com o VPA e a TSA. No caso das células HeLa essa informação já é conhecida. A atividade de deacetilases de histonas e os níveis de acetilação das histonas H3 e H4 após tratamento com VPA serão considerados na interpretação dos padrões de supraorganização cromatínica, anomalias cromossômicas e morte celular encontrados. (AU)