Comparação do perfil epigenético de genes relacionados a diferenciação neural murina em tipos celulares obtidos a partir de células tronco embrionárias diferenciadas in vitro e in vivo de células da massa celular interna de embriões

Resumo

A organização da cromatina das células eucarióticas, coordenada por modificações epigenéticas, permite que apenas uma parte do DNA seja utilizada para expressão gênica em cada tecido, determinando um padrão especifico em cada tipo celular. No entanto, estudos demonstram que o cultivo celular in vitro pode alterar este padrão através de modificações epigenéticas diferentes das que ocorrem no ambiente in vivo. A diferenciação neuronal a partir de células tronco embrionárias in vitro representa uma possibilidade para o tratamento de doenças neurodegenerativas através da terapia celular, porém avaliações das alterações destes neurônios produzidos in vitro são necessárias. No presente estudo, objetivamos estudar as modificações epigenéticas em alguns dos mais importantes genes responsáveis pela diferenciação neural (Mash1, Sox3, Pax3, Pax6) e neuronal (NeuroD, NEGR I, NEF3, Epha4), presentes em tipos celulares diferenciados in vitro e in vivo. Para tanto, células neurais em estádios de maturidade semelhantes terão seus padrões de acetilação e metilação de histonas H3 e H4, em algumas lisinas especificas sabidamente envolvidas na diferenciação neural, estudados e comparados, em grupos diferenciados in vitro a partir de células tronco embrionárias (CTE); in vivo a partir de CTE; a partir de células da massa celular interna de embriões controle. As células serão separadas utilizando anticorpos e colunas magnéticos, e o conteúdo de cromatina será separado e precipitado juntamente a anticorpos específicos (ChIP), e amplificado por PCR em tempo real. (AU)