Caracterização de Domínios de Membranas Eritrocitárias obtidos com ou sem uso de Detergente

Resumo

A formação de domínios na fase líquido-ordenada (lipid rafts), ricos em colesterol e esfingolipídios onde proteínas específicas se inserem para manter sua funcionalidade, é um fenômeno das biomembranas. Esses domínios coexistem com a fase líquido-desordenada das membranas e operacionalmente têm sido estudados através do preparo de DRMs (Detergent-Resistant Membranes). A membrana do eritrócito é um ótimo modelo para o estudo dos lipid rafts. Nosso grupo de pesquisa (Biomembranas, IB/Unicamp) tem se dedicado ao estudo da interação de moléculas anfifílicas com membranas modelo e biológicas usando abordagens metodológicas que permitem detectar alterações nas propriedades estruturais e dinâmicas dessas membranas. Recentemente, demonstramos pela primeira vez na literatura, o preparo e a caracterização de DRMs de eritrócitos obtidas com uso do detergente C12E8 (Crepaldi Domingues et al., 2009), além da caracterização de DRMs de eritrócitos obtidos a 37°C (Domingues et al., 2010) para Triton X-100. A fase líquido-ordenada foi determinada nessas DRMs pela técnica do marcador de spin (por Ressonância Paramagnética Eletrônica) e o aumento da concentração de colesterol e a presença de proteínas marcadoras de lipid rafts foram determinados.Uma vez que detergentes podem induzir a formação de domínios de membrana, nesse projeto pretendemos investigar a composição lipídica e protéica de domínios da membrana eritrocitária, obtidos sem o uso de detergentes, e compará-los com DRMs. Além disso, pretendemos ampliar a caracterização lipídica dessas estruturas, quantificando o conteúdo de esfingomielina e glicoesfingolipídios, além de colesterol. Finalmente, temos também por objetivo determinar a possível interação molecular entre anestésicos locais e componentes dos domínios da membrana, procurando relacioná-los a organização/estruturação desses domínios.