Clonagem, expressão, purificação e caracterização estrutural da proteína triparedoxina peroxidase de Leishmania braziliensis

Resumo

As leishmanioses são causadas por protozoários do gênero Leishmania, sendo transmitidas por insetos flebotomíneos. Esta doença afeta cerca de 350 milhões de pessoas em 88 países. De acordo com a Organização Mundial da Saúde, as leishmanioses constituem um problema de saúde pública, entretanto esforços para a descoberta de novos tratametos são insuficientes. A terapia atualmente utilizada apresenta elevada toxicidade, havendo também formas clínicas resistentes aos fármacos. Sendo a Leishmania um protozoário digênico, a existência mecanismos eficientes de evasão de moléculas tóxicas, como espécies reativas de oxigênio e nitrogênio, é crucial para a capacidade de sobrevivência e replicação do parasita nas células do hospedeiro. A tryparedoxin peroxidase (TXNPx), um membro da família das peroxirredoxinas, é vital para a sobrevivência da Leishmania durante o estresse oxidativo gerado pelos macrófagos. Essa enzima antioxidante, que não está presente em mamíferos, participa de uma cascata enzimática para a detoxificação de hidroperóxidos descrita em Tripanosomatídeos e oferece novas opções para o desenvolvimento de agentes anti-Leishmania mais específicos. Encontrou-se, em Leishmania que superexpressava a TXNPx, um maior índice de crescimento, menor tempo de duplicação e uma maior resistência ao estresse oxidativo. Este trabalho tem como objetivo realizar a clonagem, expressão, purificação e estudos estruturais da tryparedoxin peroxidase de Leishmania braziliensis. Primeiramente, a sequencia nucleotídica será amplificada e clonada para a expresão em sistema procarioto. A proteína será purificada por métodos cromatográficos e serão realizados ensaios de cristalização além de análises espectroscópicas e de homogeneidade estrutural através dos ensaios de Espalhamento Dinâmico de Luz (DLS) e Dicroísmo Circular.