Identificação e Isolamento de Células Progenitoras Cardíacas Usando Aptâmeros

Resumo

Alternativas para o tratamento de miocárdio isquêmico tem sido alvo de intensa investigação nos últimos anos e terapia celular é uma das grandes promessas na área. Nosso laboratório tem perseguido esse objetivo utilizando células de diferentes origens e as evidências sugerem que os benefícios detectados sobre a diminuição da deterioração cardíaca pós-infarto decorrem da formação de novos vasos e imunomodulação devido a citocinas secretadas e não por geração de novos cardiomiócitos (CMs), que seria altamente desejada. A geração de iPS tornou possível a obtenção de células semelhantes a células-tronco embrionárias, mas paciente específicas e com uma capacidade ampla de diferenciação. A partir delas podem ser obtidas células progenitoras cardíacas (CPCs), interessantes para terapia de reparo do miocárdio por serem capazes de gerar CMs. Além disso, dados recentes mostram que corações de roedores de um dia se regeneram completamente após ressecção cirúrgica parcial e novos CMs são formados em corações adultos infartados tratados previamente por sete dias com timosina ²4. A identificação de células precursoras cardíacas tanto em estagio embrionário como adultos tradicionalmente é feita utilizando conhecidos marcadores intracelulares de desenvolvimento cardíaco (normalmente fatores de transcrição, como o Nkx2.5 ou genes da maquinaria contrátil), e apenas algumas moléculas de superfície (Flk-1, c-kit, MDR-1 e Sca-1), mas que não são específicas. A identificação de marcadores de superfície específicos será fundamental para implementar estratégias de purificação de progenitores cardíacos, que existem em pequeno número. A técnica para a descoberta de novos ligantes a partir de células inteiras, Cell-SELEX pode ser empregada para esta finalidade e por seu intermédio, aptâmeros são selecionados pela sua afinidade de se ligar a moléculas específicas de precursores cardíacos. Neste contexto, o objetivo desse trabalho será a seleção de aptâmeros capazes de reconhecer especificamente a assinatura de membrana de células progenitoras cardíacas e distingui-la de outros tipos celulares presentes no coração. Além disso, a ferramenta que será desenvolvida é potencialmente patenteável e poderá ser usada futuramente para identificar quais são os alvos especificamente reconhecidos. Após validados, já teremos os ligantes para o enriquecimento da população por MACS ou FACS, sua análise por técnicas de high throughput e sua posterior utilização clínica.