Investigação sorológica e molecular de Toxoplasma gondii em doadores de sangue

Resumo

A infecção por Toxoplasma gondii, agente etiológico da toxoplasmose, apresenta distribuição mundial e acomete humanos de todas as idades e etnias. A disseminação da infecção se da por diferentes formas, incluindo a transfusão de hemocomponentes. Em indivíduos imunocompetentes este parasito não oferece grandes riscos, porém em indivíduos imuncomprometidos o acometimento pode ser grave e acarretar alta mortalidade. Objetivos. O objetivo geral deste projeto é detectar com o uso de métodos sorológicos e caracterizar com o uso de métodos moleculares a infecção por T. gondii em doadores de sangue. Seus objetivos específicos compreendem: 1. Realizar a triagem sorológica para anticorpos anti-T. gondii (IgM e IgG) em candidatos aptos à doação de sangue e identificar seus perfis [(IgM não reagente; IgG não reagente); (IgM reagente; IgG não reagente); (IgM reagente; IgG reagente); (IgM não reagente; IgG reagente)]. 2. Detectar a presença de DNA genômico de T. gondii no sangue periférico dos doadores com o uso dos métodos de amplificação gênica (PCR convencional e PCR em tempo real). 3. Caracterizar, nos doadores com PCR positivo, os genótipos de T. gondii com o uso dos marcadores moleculares. 4. Rastrear as unidades de hemocomponentes que apresentarem resultado positivo por IgM e PCR (cn PCR e RT-PCR) e avaliar seus receptores com o uso dos mesmos métodos sorológicos e moleculares. Casuística e métodos. Serão selecionados pelo menos 2000 doadores de sangue aptos à doação, no Hemocentro de São José do Rio Preto, Estado de São Paulo. Para cada doador será preenchida uma ficha de dados epidemiológicos e serão colhidas duas amostras de sangue periférico no momento da doação. Uma será utilizada para a pesquisa de anticorpos (IgM e IgG) anti-T. gondii, com o uso do método ELISA. A outra será utilizada para a extração do DNA genômico com o uso de kits comerciais. A amplificação gênica do T. gondii será realizada por PCR convencional (cnPCR) e PCR em tempo real (qPCR). As amostras com resultado positivo por PCR serão genotipadas com o uso dos marcadores SAG1, SAG2 (50-and 30-SAG2, alt.SAG2) SAG3, BTUB, GRA6, C22-8, c29-2, L358, PK1 and Apico. Conforme o perfil sorológico, obtido a partir do método ELISA, os doadores de sangue serão separados em quatro grupos (G1, G2, G3 e G4). No G1 serão incluídos os doadores com perfil sorológicos IgM e IgG não reagentes. Em G2, serão incluídos aqueles com IgM e IgG reagente; em G3, aqueles IgM reagente e IgG não reagente; e G4 IgM não reagente e IgG reagente. Todos estes grupos serão confrontados com o resultado do PCR para T. gondii. Os resultados obtidos e os PCR serão comparados entre si com o uso dos testes Ç2 e exato de Fisher, quando for o caso. Também serão calculados os valores de Odds Ratio e do intervalo de confiança a 95%. Resultados esperados. Espera-se que os resultados a serem alcançados com este projeto contribuam para conhecer se o T. gondii circula no sangue periférico de doadores e que permitam estimar que riscos a presença de tal parasito oferece aos pacientes que necessitam de transfusão de hemocomponentes. (AU)