Aspectos funcionais da proteína de cromatina RaHMG-D durante o desenvolvimento de Rhynchosciara americana

Resumo

Nosso grupo identificou uma sequencia homóloga a HMG-D (High Mobility Group D), membro de uma família de proteínas nucleares abundantes, em uma biblioteca de cDNA de glândulas salivares de Rhynchosciara americana, construída durante o último ciclo de replicação politênica, momento no qual também ocorre amplificação gênica em diversas regiões cromossômicas. O fato da proteína codificada por esta mensagem poder estar envolvida com remodelamento de cromatina e ativação de transcrição torna-a um alvo interessante para estudo, uma vez que não são relatados na literatura nem o envolvimento desta proteína com amplificação gênica nem com a estrutura de cromossomos politênicos. Dados preliminares indicam que ela pode estar envolvida com eventos presentes durante o desenvolvimento larval de Rhynchosciara americana. Este projeto visa complementar dados moleculares que o laboratório já possui, bem como com ensaios funcionais e morfológicos, proporcionar uma caracterização do possível papel deste gene durante o desenvolvimento de R. americana. Técnicas como RT-PCR em tempo real e silenciamento por RNAi estão padronizadas para este gene e através da produção de um soro policlonal anti-RaHMG-D pretende-se caracterizar por western blots seu perfil proteico em diferentes tecidos e determinar possíveis modificações pós-traducionais em westerns 2D. Comparações em cortes histológicos e em preparações de cromossomos, de indivíduos normais e silenciados, podem elucidar possíveis funções deste gene. Pretende-se ainda utilizar microscopia eletrônica de transmissão associada ao uso de anticorpos marcados com partículas de ouro como uma abordagem de maior resolução; proporcionando assim resolução morfológica dos locais ocupados por esta proteína nos cromossomos politênicos ao longo do desenvolvimento. (AU)