Avaliação dos processos de autofagia e morte celular em osteócitos de osso alveolar de ratas ovariectomizadas tratadas com estrógeno

Resumo

O estrógeno exerce importante função na sobrevivência dos osteócitos, sendo que em condições de deficiência estrogênica observa-se uma diminuição no número dessas células e subsequente aumento na reabsorção óssea. Há evidências de que a autofagia também exerça importante papel na viabilidade dos osteócitos e, além disso, tem sido proposto que o estrógeno exerce importante papel na regulação da autofagia em determinados tipos celulares; no entanto, nos osteócitos, esse mecanismo ainda é desconhecido. Os efeitos do estrógeno sobre a viabilidade dos osteócitos ainda permanecem em constante debate. Além disso, o efeito deste hormônio na regulação da autofagia nos osteócitos e sua relação com a remodelação óssea ainda não é conhecida. Assim, será proposto avaliar a influência do estrógeno na regulação da autofagia e morte celular de osteócitos; além disso, pretendemos investigar uma possível correlação entre o processo de morte dos osteócitos e a remodelação do osso alveolar de ratas ovariectomizadas. Serão utilizadas 66 ratas Wistar com 4 meses de idade, que constituirão os grupos SHAM-operadas ou ovariectomizadas (OVX); após 24 dias do procedimento cirúrgico, as ratas serão distribuídas em 3 grupos com 18 animais cada e seu peso será monitorado semanalmente: Grupo I (SHAM) e Grupo II (OVX-Controle) - tratados com solução veículo (óleo de milho) via subcutânea durante 15, 30 e 45 dias; Grupo III (OVX-EST) - tratado com 30µg/Kg/dia de diethylstilbestrol, via subcutânea durante 15, 30 e 45 dias. Em seguida, os animais serão sacrificados, e os fragmentos da maxila (direita e esquerda) contendo o osso alveolar dos primeiros molares serão removidos e fixados em formaldeído (pH 7,4). Após descalcificação em EDTA, as amostras serão processadas para microscopia de luz e submetidas às análises histomorfométrica e imuno-histoquímicas. Algumas amostras serão fixadas em glutaraldeído/formaldeído e processadas para análise em microscopia eletrônica de transmissão. A fim de verificar o processo de autofagia em osteócitos serão utilizados marcadores (BECN1, MAP LC3A e SQSTM1); a apoptose será investigada com auxílio dos métodos do TUNEL e imuno-histoquímico para detecção de caspase-3 clivada e bcl2, além de imagens ultraestruturais. Será também investigado se há uma possível correlação entre os processos de autofagia e apoptose, bem como se há uma correlação entre a morte de osteócitos e o processo de reabsorção óssea. (AU)