Mecanismos celulares e moleculares envolvidos no início da formação do osso alveolar de ratos

Resumo

O tecido ósseo é um tipo especializado de tecido conjuntivo, constituído por diferentes tipos celulares (células de revestimento, osteoblastos, osteócitos e osteoclastos) e por uma matriz extracelular mineralizada. O periodonto compreende as estruturas responsáveis por manter o dente nos ossos maxilar e mandibular e consiste em: cemento, ligamento periodontal, osso alveolar e gengiva. O processo alveolar desenvolve-se em conjunto com o desenvolvimento e erupção dos dentes e começa a ser formado durante a vida fetal, com deposição de mineral em pequenos focos da matriz mesenquimatosa que circunda os germes dentários. O osso alveolar, o qual reveste internamente o processo alveolar, é formado a partir das células ectomesenquimais do folículo dentário; além disso, a formação do osso alveolar ocorre somente após o início da formação da raiz. Runx2 é um específico regulador da diferenciação de osteoblastos e Osterix, um importante fator de transcrição na formação do tecido ósseo. Embora a fosfatase alcalina seja considerado um marcador de osteoblastos, esta é expressa também em pré-osteoblastos (osteoblastos em diferenciação). Em contrapartida, tem sido sugerido que a osteocalcina é expressa em osteoblastos maduros. Considerando-se que o processo alveolar e o osso alveolar são formados em momentos distintos, embora estejam intimamente associados, pretendemos investigar a imunoexpressão destes marcadores de osteoblastos em diferentes fases da formação destes tecidos. Além disso, pretendemos avaliar a fase inicial da reabsorção óssea do processo/osso alveolar e verificar se há uma correlação entre o fenômeno de apoptose de osteoblastos e osteócitos com o processo de reabsorção óssea. Serão utilizados fetos obtidos de ratas prenhes que serão sacrificadas aos 16, 18 e 20 dias de prenhez; ratos com 5, 10 e 15 dias de idade (após o nascimento) também serão utilizados. Após o sacrifício, as cabeças dos embriões e recém-nascidos serão coletadas, aparadas e, imediatamente, fixadas em formaldeído. Após a descalcificação, as peças serão desidratadas e incluídas em parafina. Os cortes, com 6µm de espessura, contendo o processo/osso alveolar da região do 1º molar superior serão corados com hematoxilina & eosina (HE) ou tricrômico de Masson, para a descrição morfológica; alguns cortes serão submetidos as reações imuno-histoquímicas para detecção de fosfatase alcalina, RUNX2, Osterix, osteocalcina, VEGF e Ki-67; o método do TUNEL, para detecção e quantificação de osteoblastos e osteócitos em apoptose, será também realizado. Alguns cortes também serão submetidos à reação histoquímica da fosfatase ácida tartarato resistente (TRAP), usado como marcador de osteoclastos; o número de osteoclastos TRAP-positivos na superfície linear óssea será calculado. Fragmentos de maxila contendo o processo/osso alveolar do 1º molar serão fixados com solução de glutaraldeído/formaldeído e processados para inclusão em araldite, para análise ultraestrutural. Alguns fragmentos de maxila serão fixados em glutaraldeído/formaldeído, desidratados e incluídos em LR White; os cortes ultrafinos serão submetidos a imunocitoquímica para detecção de osteocalcina. (AU)