Avaliação morfométrica, imuno-histoquímica e ultraestrutural do efeito da cimetidina na evolução da periodontite induzida em molares de ratos

Resumo

A periodontite é uma inflamação do periodonto em resposta à instalação de micro-organismos que promovem danos ao periodonto, podendo causar a perda do dente. Com o propósito de elucidar a complexa cascata de eventos celulares e moleculares envolvidos na instalação e evolução da doença periodontal, tem sido realizada a ligadura na região cervical de molares de ratos. Sabe-se que diversas citocinas liberadas na instalação do processo inflamatório na mucosa gengival estimulam a migração, fusão e atividade reabsortiva de osteoclastos e, consequentemente, a reabsorção do osso alveolar. Recentemente, tem sido demonstrado que a histamina, liberada em processos inflamatórios, estimula a osteoclastogênese. A cimetidina, um antagonista de receptores H2 para histamina utilizada no tratamento de úlceras gástricas, parece inibir a evolução de processos inflamatórias. Sendo assim, o objetivo deste estudo é investigar se a cimetidina interfere na evolução da periodontite induzida por ligadura em molares de ratos e verificar se é capaz de inibir o processo de reabsorção óssea promovido pela doença periodontal.Serão utilizados 64 ratos, divididos em dois grupos: Cimetidina (GC) e Controle Sham (GS). Ambos os grupos serão divididos em 2 subgrupos, sendo um constituído pelas hemi-maxilas esquerdas (com ligadura no 1º molar) e o outro constituído pelas hemi-maxilas direitas (sem ligadura). Após a colocação da ligadura, os animais do GC receberão cimetidina na concentração de 100 mg/kg de peso corporal do animal, diariamente. Os animais do GS receberão o veículo de diluição (soro fisiológico) em quantidade correspondente às doses de cimetidina. Após os períodos experimentais de 7, 15, 30 e 50 dias, os animais serão sacrificados e as hemi-maxilas (direita e esquerda) serão removidas e, imediatamente, fixadas. Fragmentos maxilares de 05 animais de cada grupo/período experimental serão fixadas em formaldeído e processados para microscopia de luz; fragmentos de 03 animais de cada grupo/período experimental serão fixados em solução de formaldeído/glutaraldeído e processados para microscopia eletrônica de transmissão (MET). Cortes semi-seriados corados com H&E serão usados para a análise morfológica e mensuração de alguns parâmetros: densidade numérica de células inflamatórias, perda de osso da crista alveolar e migração do epitélio juncional. A presença de MMP-1 e MMP-9 durante a evolução da doença periodontal será investigada por meio de reações imuno-histoquímicas. O número de osteoclastos TRAP-positivos na superfície óssea do processo alveolar será também estimado. A análise estatística dos resultados morfométricos será realizada utilizando-se o programa Sigma Stat 2.0 (Jandel Scientific, Sausalito, CA), seguido pelo one-way-ANOVA. A comparação múltipla entre os diferentes grupos será realizada pelo teste "Student-Newman-Keuls" e o intervalo de confiança considerado será de 95% (pd0,05). A fim de verificar se a cimetidina interfere na sobrevivência de osteoclastos, cortes serão submetidos ao método do TUNEL e a reação imuno-histoquímica para detecção de caspase-3. A detecção de RANK-L e OPG será realizada para verificar a possível interferência da cimetidina na osteoclastogênese. A análise ao MET será realizada com ênfase nas características ultraestruturais dos osteoclastos. (AU)