Papel dos proteoglicanos na biologia do cancer coloretal e de prostata humanos:um estudo in vitro do seu microambiente tumoral.

Resumo

O microambiente tumoral representa o focal onde mais se estabelece o remodelamento da matriz extracelular (ECM). Neste local também ocorrem a expressão alterada de moléculas envolvidas tanto na interação entre as células, bem como entre a célula e matriz. Esta rede funcional é determinante no comportamento das células malignas e essencial para a invasão local da célula tumoral e na formação de metástases. Os proteoglicanos, macromoléculas residentes da superfície celular e da matriz extracelular, ocupam uma posição estratégica nesse processo.No presente trabalho, estudaremos o papel dos domínios 6-O-sulfatados previamente encontrados em proteoglicanos de heparam sulfato (PGHS) em linhagens de adenocarcinoma coloretais, Caco-2 e HCT116. Para isso, a expressão de duas enzimas extracelulares, 6-O-endosulfatases, Sulf 1 e Sulf 2 serão investigadas. Estas células serão transfectadas in vitro com os cDNAs que codificam para essas enzimas, clonadas em pcDNA 3.1/Myc-His(-). A expressão dessas enzimas serão analisadas por PCR em Tempo Real, bem como por imunocitoquímica. Ensaio de afinidade por FGF-básico-biotinilado será realizado para verificar a influência da 6-O-sulfatação na ligação entre este tipo de PGHS e este fator de crescimento. Os proteoglicanos de condroitim sulfato (PGCS) dessas células também serão estudadas, pois domínios 6-O-sulfatados também foram encontrados nessa classe de macromoléculas. Estes domínios caracterizam um condroitim sulfato denominado E (CSE), relacionado na literatura com maior motilidade de células nervosas. Assim, estes PGCS serão investigados em ensaios de migração, proliferação e adesão a diferentes substratos. Ainda neste projeto, serão estudados a expressão diferencial de proteoglicanos em linhagens de adenocarcinoma de próstata, PC3, DU145, LNCaP, comparados a uma linhagem de próstata normal RWPE-1. Esperamos que nossos estudos possam fornecer novos subsídios para o entendimento da carcinogênese coloretal e prostática, uma vez que trabalhos tem mostrado participação dessas moléculas sulfatadas na biologia do câncer. (AU)