O papel dos microdomínios 6-O-sulfatados de proteoglicanos na biologia tumoral e tecidual.

Resumo

Moléculas do microambiente tumoral tem se tornado objeto de intensa pesquisa no tratamento do câncer. Os proteoglicanos constituem um alvo importante devido à sua localização, bem como por suas particularidades estruturais que os tornam moléculas regulatórias e multifatoriais. No projeto anterior, mostramos a importância da 6-O-sulfatação de proteoglicanos de heparam sulfato através de duas enzimas extracelulares 6-O-endosulfatases, Sulf 1 e Sulf 2, que removem a 6-O-sulfatação e editam esses domínios. No presente projeto, um dos objetivos é aprofundar esse estudo através da investigação dos níveis de expressão dessas duas enzimas, agora in vivo, analisando-se tecidos de câncer colorretal humanos e comparar com tecido normal adjacente. Um segundo objetivo visa ainda estudar o proteoglicano de condroitim sulfato em células de linhagem de adenocarcinoma colorretal, que também apresentam domínios 6-O-sulfatados porém nas cadeias de condroitim sulfato. Estes domínios 6-O-sulfatados caracterizam um condroitim sulfato denominado E (CS-E), relacionado na literatura com maior motilidade de células nervosas. Para esse fim, knockdown da N-acetilgalactosamina-4-sulfato 6-O-sulfotransferase (GalNAc4S-6ST), enzima responsável pela síntese do CS-E será realizado por RNA de interferência utilizando-se de shRNA. Os clones resistentes serão selecionados e isolados. Os efeitos do knockdown de GalNAc4S-6ST será investigado através de estudos estruturais e em ensaios biológicos analisando proliferação, adesão, migração e invasão celular. Além disso, pretendemos aprofundar estes estudos, investigando a via de sinalização Wnt uma vez que alguns trabalhos têm demonstrado que o ligante Wnt3a reconhece a molécula de condroitim sulfato E, embora essa via necessite ser melhor investigada. Através destes resultados, esperamos avançar na elucidação do papel que estas moléculas carregadas negativamente exercem na biologia tumoral e na progressão da doença. (AU)