Caracterização do cluster wcb de B. seminalis TC3.4.2R3 e do seu papel na síntese de antimicrobianos

Resumo

As bactérias do gênero Burkholderia possuem alta versatilidade nutricional e têm sido utilizadas para diversos fins, como manejo agrícola, biocontrole, biodegradação/biorremediação e promoção de crescimento vegetal. Diversos compostos com atividade antimicrobiana produzidos por Burkholderia spp. têm sido alvo de estudos, os quais poderiam substituir os pesticidas químicos convencionais. Os genes de Burkholderia seminalis TC3.4.2R3 associados à síntese de compostos antimicrobianos têm sido identificados por meio da análise de uma biblioteca de mutantes em projetos anteriores (Processos FAPESP nº. 2008/52407-9; nº. 2008/52406-2; nº. 08/56505-5); dentre estes genes, identificou-se um gene que codifica a enzima glicosiltransferase no cluster wcb, o qual está descrito como envolvido na síntese de capsula. Entretanto, em projetos recentes, foi observado que este gene está envolvido na síntese de um composto antimicrobiano. Assim, o presente projeto visa avaliar o papel do cluster wcb, que contém este gene, na síntese de metabólitos secundários de B. seminalis TC3.4.2R3. Para isso, a região do genoma desta linhagem, onde está localizado este gene será avaliada, os genes de interesse serão clonados e utilizados em estudos de mutação sítio dirigida e complementação. Os mutantes também serão avaliados quanto ao perfil metabólico em comparação à linhagem selvagem por meio de análise metabolômica. O teste de pareamento realizado para os mutantes M3, M4 e M7 e para a linhagem selvagem de Burkholderia contra os fungos fitopatogênicos revelou que todos os mutantes apresentam o mesmo perfil de inibição e que perderam a capacidade de inibir os patógenos Fusarium oxysporum, Ceratocystis paradoxa, C. fimbriata, Colletotrichum sp. em comparação à linhagem selvagem. Os contigs obtidos do sequenciamento de Burkholderia foram analisados com o auxílio de ferramentas de bioinformática e os genes a jusante e a montante e as possíveis regiões promotoras foram anotados, permitindo verificar que 2 ORFs (hypothetical protein and dTDP-4 dehydrorhamnose 3,5-epimerase) deste cluster são únicos para esta espécie dentro do gênero Burkholderia. (AU)